淀粉中還原糖的測定

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1、還原糖的測定3,5-二硝基水楊酸比色法班級：生科2班姓名：胡雨雨同組人：張賢明實驗目的1.掌握還原糖和總糖測定的基本原理。2.學習比色法測定還原糖的操作方法和分光光度計的使用。實驗原理還原糖是具有還原性的糖類的統(tǒng)稱。分子中含有游離醛基或者酮基的單糖和含有游離醛基的二糖都具有還原性。如葡糖糖、果糖、半乳糖、乳糖、阿拉伯糖、麥芽糖等。在堿性條件下，還原糖與3，5一二硝基水楊酸共熱，3，5一二硝基水楊酸被還原為3-氨基-5-硝基水楊酸（棕紅色物質），還原糖則被氧化成糖酸及其他產(chǎn)物。一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質顏色深淺的程度成一定的比例關系，540nm波長下測定棕紅色物質的消光值，查對標準曲線并

2、計算，便可分別求出樣品中還原糖和總糖的含量。儀器、試劑、材料儀器：（1）試管X11（2）玻璃漏斗X2（3）燒杯：1OOmlX1（4）三角瓶：100m1X1（5）容量瓶：100mlX3（6）恒溫水?。?）沸水?。?）電子天平（9）分光光度計試劑：（1）1mg/ml葡萄糖標準液：準確稱取10mg分析純葡萄糖（預先在80℃烘至恒重），置于小燒杯中，用少量蒸餾水溶解后，定量轉移到10ml的容量瓶中，以蒸餾水定容至刻度，搖勻，冰箱中保存?zhèn)溆?。?）3，5-二硝基水楊酸試劑：將0.315g3,5-硝基水楊酸和13.1ml2mol/NaOH溶液，加到25ml含有9.25g酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加0.25

3、g結晶酚和0.25g亞硫酸鈉，攪拌溶解。冷卻后加蒸餾水定容至50ml，貯于棕色瓶中備用。材料：食用面粉。注意事項1.沸水浴時應將試管口用保鮮膜封住，以防止水分蒸發(fā)引起體積誤差。2.應該待反應體系穩(wěn)定后進行比色（約10min）。3.比色時，比色皿中盛放的溶液體積不應過多，一般在2/3~3/4。4.比色時不能將溶液濺在儀器面板和儀器內(nèi)。5.標準曲線制作與樣品含糖量測定應同時進行，一起顯色和比色。6.實驗完成后洗凈儀器，放回原位。實驗步驟1.標準曲線的繪制管號1mg/ml葡萄糖標準液(ml)蒸餾水(ml)DNS(ml)葡萄糖含量（mg)光密度值0021.5010.21.81.50.220.41.61

4、.50.430.61.41.50.640.81.21.50.851.01.01.51.061.20.81.51.2實驗步驟按照上表取7支試管配好試劑，將各管搖勻，在沸水浴中加熱5min，取出后立即冷卻至室溫，再以蒸餾水定容至25ml，混勻。在540nm波長下，用0號管調零，分別讀取1-6號管的吸光度。以吸光度為縱坐標，葡萄糖毫克數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線。實驗步驟得出吸光值管號1mg/ml葡萄糖標準液(ml)蒸餾水(ml)DNS(ml)葡萄糖含量（mg)光密度值0021.50010.21.81.50.20.05220.41.61.50.40.19630.61.41.50.60.29340.81.

5、21.50.80.44151.01.01.51.00.54961.20.81.51.20.668實驗步驟以吸光度為縱坐標，葡萄糖毫克數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線實驗步驟2.?樣品中還原糖和總糖含量的測定樣品中還原糖的提?。簻蚀_稱取3.0g食用面粉，放在50ml三角瓶中，先以少量蒸餾水調成糊狀，然后加25ml蒸餾水，攪勻，置于50℃恒溫水浴中保溫20min，使還原糖浸出。離心，用2Oml蒸餾水洗殘渣，再過濾，將兩次的濾液全部收集在50ml的容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，混勻，作為還原糖待測液。實驗步驟3）顯色和比色，取2支25ml刻度試管，編號，按下表所示的量操作。管號還原糖待測液（ml)蒸餾水（m

6、l)DNS(ml)光密度值查曲線葡萄糖含量(mg)樣品10.51.51.50.1120.27樣品20.51.51.50.1210.28根據(jù)函數(shù)y=0.595x-0.046可得葡萄糖含量樣品光密度平均值=(0.112+0.121)/2=0.1165實驗結果及數(shù)據(jù)處理已知提取液總體積為100ml、測定時取用體積為0.5ml、樣品毫克數(shù)為3000mg、根據(jù)以下公式進行計算。樣品平均葡萄糖=0.27+0.28=0.275mg還原糖%=（0.275*100*100%）/（0.5*3000）=18.3%其他方法糖含量定量測定的方法除此之外還有①高效液相色譜法（HPLC）②苯酚-硫酸法③蒽酮法④雙折射現(xiàn)象心

7、得從結果中所得到的的心得并不是所有的糖有甜的味道，只有少數(shù)結構簡單的糖是有甜味的，如葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、果糖、乳糖等，充斥于各種甜食之中的就是它們。自然界存在的多數(shù)糖——多糖，吃起來并不甜，各種糧食都是含糖大戶，主要是淀粉和糊精。糧食不僅可以提供能量，而且還是B族維生素、膳食纖維、礦物質的重要來源，因此人們的生活中的確不能沒有它。當我們食用面食時，雖然食用的是主食，但事實上其中的一半都是糖分所以