紫外法 多不飽和脂肪酸的測定

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1、GB/T21495—2008/ISO7847:1987動植物油脂具有順，順1，4-二烯結(jié)構(gòu)的多不飽和脂肪酸的測定1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了酶法測定動植物油脂中順，順l,4-二烯結(jié)構(gòu)多不飽和脂肪酸的方法，實(shí)際上就是指具有w3和w6型多不飽和結(jié)構(gòu)的亞油酸（9,12-十八碳二烯酸）和亞麻酸（9,12,15-十八碳三烯酸）系列。其結(jié)構(gòu)是：本標(biāo)準(zhǔn)不適用于油脂中w8和w9型多不飽和脂肪酸及含有支鏈脂肪酸的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否

2、可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T15687油脂試樣制備(GB/T15687-1995，eqvIS0661:1989)1S05555動植物油脂取樣3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1順,順1,4-二烯脂肪酸cis,cis1,4-dienefattyacids本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法所測定的脂肪酸，以樣品的質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示。4原理在室溫條件下，樣品皂化后產(chǎn)生脂肪酸，具有順,順,4-二烯結(jié)構(gòu)的脂肪酸被酶促氧化，產(chǎn)生的氧化酸在最大吸收波長(約235nm)下測定吸光度，同時做樣品空白試驗(yàn)，計(jì)算樣品中多不飽和脂肪酸的含量。5試劑和材料所用試劑均為分

3、析純，水為蒸餾水或同等純度的水。5.1正己烷5.2鹽酸溶液c(HCl)≈0.5mol/L。5.3氫氧化鉀—乙醇溶液[c(KOH)≈0.5mol/L]5.3.1貯備液稱取65g氫氧化鉀（86%氫氧化鉀）溶于約80mL水中，冷卻后稀釋至100mL。5.3.2稀釋液5GB/T21495—2008/ISO7847:1987吸取5mL貯備液(5.3.1)用體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇稀釋至100mL。此溶液應(yīng)臨用時現(xiàn)配。5.4硼酸鉀緩沖液c(K3BO3)=1.0mol/L(pH=9.0)。稱取61.9g硼酸和25.0g氫氧化鉀（86%氫氧化鉀）加熱攪拌溶于約800mL水中，冷卻至室溫，測定pH，如有

4、必要，可用鹽酸或氫氧化鉀溶液調(diào)pH至9.0，然后用水稀釋至1000mL。5.5硼酸鉀緩沖液c(K3BO3)=0.2mol/L(pH=9.0)。將200mL1.0mol/L茹的硼酸鉀緩沖液（5.4）用水稀釋至1000mL，用冰冷卻。5.6脂肪氧化酶稀釋液5.6.1脂肪氯化酶酶的活力至少為50000U/mg[一個酶的活力單位（U）定義為實(shí)驗(yàn)條件下，每分鐘可氧化1.2×10-4μmol亞油酸所需的酶量]。在凍干狀態(tài)下，于-18℃或更低的溫度保存時，該酶在數(shù)年內(nèi)均是穩(wěn)定的。注：低活力的酶制劑會導(dǎo)致結(jié)果偏低，過高活力的酶制劑不會比活力在50000U/mg～100000U/mg范圍內(nèi)的酶制劑得到

5、更好的結(jié)果。5.6.2貯備液稱取相當(dāng)于650000U酶活的酶（5.6.1）溶于10mL冰冷的0.2mol/L硼酸鉀緩沖液（5.5）中。該儲備液在-18℃或更低的溫度下可以長期保存。5.6.3工作液將2mL貯備液（5.6.2）和8mL冰冷的0.2mol/L硼酸鉀緩沖液（5.5）混合。5.7脂肪氧化酶滅活液吸取數(shù)毫升脂肪氧化酶稀釋液（5.6）至試管中，并保證無液滴粘附在試管壁上，將試管浸入沸水?。?.6）中加熱至少5min，稀釋液的液面應(yīng)低于水浴的液面。5.8參比油如葵花籽油或棉籽油，已知多不飽和脂肪酸含量（用氣相色譜法準(zhǔn)確測得，并以參比油的質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示），并假定其全為順,順1,4-二烯

6、結(jié)構(gòu)的脂肪酸。注：無位置異構(gòu)和幾何異構(gòu)的甘油三亞油酸酯可作為參比。5.9氮?dú)饧兌炔坏陀?9.5%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))。6儀器所用玻璃器皿應(yīng)非常干凈。實(shí)驗(yàn)室常用儀器，尤其是下列儀器。6.1具塞容量瓶：100mL。6.2單標(biāo)移液管：1mL，10mL，20mL。6.3刻度移液管：1mL，10mL。6.4具塞試管：10mL，干燥?？捎镁呷止夤舛扔?jì)比色杯（見6.8）替代（見9.6.2的注1）。6.5離心機(jī)：10mL離心試管。6.6水浴：沸騰。6.7水?。簻囟缺３衷?50±2)℃。6.8分光光庋計(jì)：可于235nm測量吸光度，配有10mm石英比色杯。6.9分析天平。7取樣5GB/T21495—2008/

7、ISO7847:1987按IS05555進(jìn)行。8試樣制備按GB/T15687進(jìn)行。9分析步驟9.1驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)在分析試樣時，建議與試樣平行分析已確知多不飽和脂肪酸（5.8）含量的參比油，以核對分析步驟。9.2試樣稱取50mg～200mg（取決于預(yù)期的多不飽和脂肪酸含量）試樣（第8章），精確至0.1mg，于100mL容量瓶A（6.1）中。注：當(dāng)所取試樣數(shù)量相對于10mg～80mg多不飽和脂肪酸時，所測之最大吸光度在0.07～0.5之間。9.3皂化用單標(biāo)移液管（6