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《淡水湖泊中類蛭弧菌的分離方法》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第30卷第1期礦物學(xué)報(bào)Vol.30，No.12010年3月ACTAMINERALOGICASINICAMar.，2010文章編號(hào):1000-4734(2010)01-0077-06淡水湖泊中類蛭弧菌的分離方法1，21*1，2曾佳，梁小兵，陸婷(1.中國(guó)科學(xué)院地球化學(xué)研究所環(huán)境地球化學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州貴陽550002;2.中國(guó)科學(xué)院研究生院，北京100039)摘要:從貴州阿哈湖、百花湖及云南滇池不同深度的湖水中篩選出2株宿主菌株。經(jīng)16SrRNA基因序列分析，這2株宿主菌分別鑒定為腸桿菌(Enterobacteriales)和黃色單胞菌(Xant
2、homonadales)。分別利用這2株宿主菌，從湖水樣品中獲得到了類蛭弧菌噬菌斑。通過吸光度分析、用淡水類蛭弧菌的特異性引物進(jìn)行基因擴(kuò)增、DNA序列分析等一系列方法，證實(shí)了所分離的菌株為類蛭弧菌。建立了用同一生長(zhǎng)環(huán)境中的宿主菌來分離類蛭弧菌的方法，并用該方法從淡水湖泊中分離出了不同類群的類蛭弧菌菌株。關(guān)鍵詞:類蛭弧菌;分離;宿主菌;PCR;DNA序列分析中圖分類號(hào):Q939.99;X172文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A作者簡(jiǎn)介:曾佳，男，1976年生，碩士研究生，從事環(huán)境與生物地球化學(xué)的研究工作.E-mail:zjbioch@163.com［7-10］類蛭弧菌［
3、Bdellovibrio-and-likeorganisms法。人們通常采用副溶血弧菌菌株P(guān)-5、鰻?。?，11-12］(BALOs)］為革蘭氏陰性、捕食性細(xì)菌，影響其它菌、溶藻弧菌、嗜水氣單胞菌、大腸桿菌作細(xì)菌的致死率，如環(huán)境中的致病菌副溶血弧菌、創(chuàng)為宿主來對(duì)類蛭弧菌進(jìn)行分離培養(yǎng)。以上細(xì)菌雖傷弧菌和霍亂弧菌等。1962年首次報(bào)道發(fā)現(xiàn)了能有效地分離類蛭弧菌，但這些宿主菌不一定是［1］蛭弧菌。目前將與蛭弧菌具有相似生活特性所研究環(huán)境中的優(yōu)勢(shì)菌，在研究類蛭弧菌與其所的一類細(xì)菌稱為“類蛭弧菌”。根據(jù)耐鹽性，將蛭處環(huán)境之間的相互關(guān)系時(shí)，沒有太大的說服力?；?/p>
4、菌分為2大類，淡水(或陸地)類群與海洋(或?yàn)榱搜芯款愹位【纳鷳B(tài)和地球化學(xué)功能，我們［2-4］噬鹽)類群。我國(guó)現(xiàn)階段對(duì)類蛭弧菌的研究直接從所研究的環(huán)境中分離出宿主菌，而不是采主要集中在海洋類群，對(duì)淡水類群卻很少涉及。用從其他環(huán)境中分離出來的已知的宿主菌來分離實(shí)際上，淡水湖泊中的類蛭弧菌無論在水產(chǎn)養(yǎng)殖、類蛭弧菌。這樣更能反映環(huán)境中類蛭弧菌及其被環(huán)境治理方面都有很大的潛在價(jià)值，需要我們?nèi)ゲ妒臣?xì)菌之間的相互關(guān)系。通過對(duì)阿哈湖、百花發(fā)掘。在本次實(shí)驗(yàn)中，我們從貴州阿哈湖、百花湖湖及滇池湖水中類蛭弧菌分離培養(yǎng)和鑒定的研和云南滇池三個(gè)淡水湖泊中分離類蛭弧菌進(jìn)行究
5、，證明這是一種研究環(huán)境中類蛭弧菌的有效研究。方法。從不同環(huán)境中分離類蛭弧菌然后作進(jìn)一步的1實(shí)驗(yàn)方法研究，是目前研究類蛭弧菌最普遍的研究步驟。類蛭弧菌的分離培養(yǎng)方法有多種，例如將宿主菌1.1樣品采集［5］和樣品充分混合后直接在培養(yǎng)基上凃布;也可以將宿主菌液先均勻凃布在培養(yǎng)基上后再將樣品第一次樣品采集分離被捕食細(xì)菌:分別從阿［6］點(diǎn)樣于其上;但最常用的是雙層瓊脂平板培養(yǎng)哈湖、百花湖和滇池采集表層水用于分離宿主菌。第二次樣品采集:用已分離的宿主菌來分離樣品中的蛭弧菌。從上述三個(gè)湖泊中(圖1)采集表收稿日期:2009-06-16層、中層和底層水湖水(水深不
6、足3m只采集表層基金項(xiàng)目:貴州省科學(xué)技術(shù)基金(20092040);國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(40473050);國(guó)家重大基礎(chǔ)研究項(xiàng)目(2006CB4003200)和底層水或者只采集表層水)。每個(gè)采樣點(diǎn)采集*通訊作者，E-mail:liangxiaobing@vip.skleg.cn2個(gè)平行樣。78礦物學(xué)報(bào)2010年圖1阿哈湖、百花湖和滇池采樣點(diǎn)Fig.1.ThesamplingstationsinLakeAha，BaihuaandDianchi.中，冷凝。上層膠先加熱融化后置于47℃恒溫水1.2宿主菌的分離培養(yǎng)浴。在3.5mL上層膠中加入4.5mL水樣
7、、0.50-1宿主菌Ⅰ的分離:水樣梯度稀釋至10、10、mL宿主細(xì)胞，混均后倒于下層膠上，25℃培養(yǎng)至-2-3-410、10和10倍。分別凃布在富集培養(yǎng)基上，25有透明噬菌斑生成。℃培養(yǎng)至形成菌落。富集培養(yǎng)基組成:蛋白胨10(2)液體培養(yǎng):宿主菌固體培養(yǎng)長(zhǎng)出菌苔，加g，酵母浸汁5g，氯化鈉10g，瓊脂15g，蒸餾水15mL滅菌蒸餾水收集宿主菌懸液。然后取30mL［6］L。調(diào)節(jié)至pH8.0。含3.94mg/LCaCl2·H2O，203.3mg/LMgCl2·0-1宿主菌Ⅱ的分離:水樣分別稀釋至10、10、6H2O的無菌水于三角瓶中。加入0.5mL宿主
8、細(xì)-2-3-410、10和10。分別凃布在培養(yǎng)基上，25℃培胞懸液，挑取單個(gè)噬菌斑加入三角瓶中。在25℃養(yǎng)至形成菌落。培養(yǎng)
