資源描述：
《大豆磷脂的提取及分析.doc.deflate.doc.gzip》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、實訓(xùn)二大豆磷脂的提取、分析及卵磷脂咀嚼片的的制備與檢驗大豆磷脂的提取及含量測定一、試劑與儀器1、試劑⑴氯化鋅溶液：精確稱取氯化鋅6.86g，定容于500ml容量瓶中。⑵大豆市售⑶無水乙醇------10瓶⑷磁力攪拌器⑸對苯二酚溶液：取對苯二酚0.5g，加水適量使溶解，加硫酸1滴，加水稀釋成100ml。⑹鉬酸銨硫酸試液：取鉬酸銨2.5g，加硫酸15ml，加水使溶解成100ml，即得。本液配制后兩周即不適用。⑺亞硫酸鈉試液：取無水亞硫酸鈉20g，加水100ml使溶解，即得。本液應(yīng)臨用新制。⑻磷酸二氫鉀⑼濃硫酸⑽過氧化氫⑾石油醚、⑿氯仿、
2、甲醇、冰乙酸⒀20％硫酸銨⒁羧甲基纖維素鈉⒂硅膠GF254⒃載玻片2、儀器凱氏燒瓶，恒溫水浴鍋，濾紙；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱；電熱套，天平，分光光度計，刻度比色管，硅膠G板，抽濾裝置二、實驗操作㈠、大豆磷脂的提取及含量測定1、5斤大豆用粉碎機粉碎得大豆粉2、卵磷脂的提?、欧Q取一定質(zhì)量的大豆粉末，加入一定體積95%的乙醇，置于不同溫度的水浴鍋內(nèi)，一定時間后取出，減壓過濾。見下表料液比提取時間提取溫度氯化鋅1:202.535101:201.540151:152.54051:15235151:151.545101:102.545151:101
3、.53551:2024551:1024010(2)試驗步驟：將溶有卵磷脂的乙醇溶液置于磁力攪拌器下，一邊攪拌一邊加入一定量ZnCl2溶液，繼續(xù)攪拌20min;取出，減壓過濾，并將濾液置于蒸發(fā)皿上蒸干;取出產(chǎn)品進行定性檢測。㈡磷含量測定標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：取105℃干燥至恒重的磷酸二氫鉀約0.13g，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，精密量取10ml置100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，每1ml中含磷（P)約為30ug。樣品溶液的制備：取本品約0.15g，精密稱定，置凱氏燒瓶中,加硫酸20ml與硝酸50ml，緩緩加熱
4、至溶液呈淡黃色，小心滴加過氧化氫溶液，使溶液褪色，繼續(xù)加熱30分鐘，冷卻后，轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。測定方法：精密量取對照品溶液與樣品溶液各2ml，分別置50ml量瓶中,各依次加入鉬酸銨硫酸試液4ml，亞硫酸鈉試液2ml與新鮮配制的對苯二酚溶液2ml，加水稀釋至刻度，搖勻,暗處放置40分鐘，照可見-紫外分光光度法,在620nm的波長處分別測定吸光度，計算含磷量。硅膠薄層板的制備【實驗材料】1．器材玻板（5cm×20cm或10cm×20cm，厚度5mm）、直徑10cm乳缽、烘箱、干燥器。2．試劑與試藥硅膠G，羧甲
5、基纖維素鈉。3．0.4%羧甲基纖維素鈉的配制：取4g羧甲基纖維素鈉加純凈水使成1000ml，室溫浸泡過夜，煮沸使其溶解，補足溶劑減少量，即得。4、藥棉5、漏斗6、燒杯7、拉板器（藥匙）【實驗方法】1、臨用前將，0．4%羧甲基纖維素鈉先用棉花過濾，以除去其中的沉淀不溶物(否則鋪板有麻點)。2、按硅膠G-0.4%羧甲基纖維素鈉溶液（1：2.5）的比例配好研磨均勻，注意不要有氣泡，研磨時向一個方向研磨，然后用機械攪拌一段時間除去里面的氣泡，再靜置半小時就可以鋪板了。3、鋪板：將研磨均勻的硅膠傾倒于鋪板器內(nèi)，勻速拉過玻璃板。鋪板時，拉鋪板器
6、的速度不要過快，也不要太慢。（或者將載玻片置于平臺上，用藥匙舀取糊狀硅膠，均勻地鋪在載玻片表面。鋪板時，可以順著板中間倒，也可以順著某個邊緣倒，也可以用玻璃棒引著溶液平鋪在玻璃板上，倒時也要注意不要引入小氣泡。如有需要，可以雙手10個指頭托住玻璃板，有節(jié)奏的顛簸，使得糊狀硅膠分布勻稱。）4、涂好薄層的玻璃板，置水平臺上于室溫下晾干后，在120℃烘30分鐘（105℃烘120分鐘），取出，置干燥器中貯存，臨用時取出。卵磷脂薄層色譜實驗【實驗材料】1．器材10ml量筒、層析缸（大小與所所鋪的薄層板相配）、點樣毛細管、硅膠G薄層板、顯色噴霧
7、瓶、臺稱、水浴鍋、烘箱。2．試劑與試藥氯仿、甲醇、冰乙酸、甲醇、95%乙醇、硫酸等。3．10%硫酸乙醇溶液的配制：用量筒量取硫酸10ml，緩慢加至100ml95%乙醇中，搖勻，放冷，即得?！緦嶒灧椒ā?．硅膠薄層板劃線；2、取磷脂樣品50mg，加入2～3滴石油醚使之溶解，3、照薄層色譜法，用毛細管吸取上述溶液于硅膠G薄層板上；以在氯仿：甲醇：乙酸：水(85：15：10：3，V/V)為展開劑，展開，取出，記錄展開劑的前沿位置，晾干，記下展開劑的位置。4、顯色向干燥的薄板噴灑20％硫酸銨(加入4ml濃硫酸)，直到薄板變得透明，在220℃
8、下烘烤20min。5、測算Rf值溶質(zhì)在紙上的移動速度率可用遷移率Rf值表示，Rf值主要決定于被分離物質(zhì)在兩相間的分配系數(shù)。在同一條件下，Rf值是個常數(shù)，不同物質(zhì)的Rf值不同，這一性質(zhì)可作為混合物分離鑒定的依據(jù)。薄板顯色成功后，對不同斑
