《疫學方法技術》PPT課件

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1、第21章免疫學方法技術第一節(jié)基于Ag-Ab反應的檢測方法抗原-抗體反應：指抗原與相應抗體在體內(nèi)、外發(fā)生高度特異性結(jié)合反應。由于實驗所用的抗體存在于血清中，故又稱血清學反應（serologicalreaction)用于：抗原（微生物、細胞、激素、細胞因子、腫瘤標志物等）、抗體的檢測。特異性抗原抗體反應的可見性適當?shù)谋壤蜐舛瓤赡嫘钥乖贵w反應的特點應用1、利用已知抗原檢測未知抗體（1）檢測病原微生物的相應抗體以輔助診斷疾病：傷寒病、流行性乙型腦炎、AIDS病等。（2）檢測自身抗體—診斷自身免疫病：SLE、類風濕性關節(jié)炎等。2、利用已知抗體檢測未知抗原（1）鑒定病原菌：診斷疾?。?

2、）檢測腫瘤相關抗原：檢測甲胎蛋白以診斷肝癌（3）檢測血型抗原、HLA抗原：鑒定血型，親子鑒定（4）檢測藥物半抗原：確認運動員是否服用興奮劑沉淀反應補體參與反應中和反應2341免疫標記凝集反應2435Ag-Ab反應的基本類型一、凝集反應（agglutinationreaction）概念：細菌、細胞等顆粒性抗原或包被有抗原的顆粒狀物質(zhì)（如聚苯乙烯乳膠等）與相應的抗體結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集團，稱為凝集反應。1、直接凝集：將細菌或紅細胞與相應的抗體直接反應，出現(xiàn)細菌凝集或紅細胞凝集現(xiàn)象。又分為玻片法和試管法。2、間接凝集：將可溶性抗原包被在紅細胞或乳膠顆粒表面，與相應抗體反應出現(xiàn)顆粒凝

3、集現(xiàn)象。細菌的鑒定和血型的檢查檢測病原體可溶性抗原，病原體感染后產(chǎn)生的抗體二、沉淀反應（precipitation）概念：可溶性抗原（免疫球蛋白、細胞裂解物、組織浸液等）與相應抗體結(jié)合，形成不溶性免疫復合物，出現(xiàn)不透明的沉淀物。在液體中進行出現(xiàn)絮狀沉淀，在半固體瓊脂凝膠上進行，形成白色的沉淀。1．單向免疫擴散(singleimmunodiffusion)2．雙向免疫擴散(doubleimmunodiffusion)3．免疫電泳(immunoelectrophoresis)4．免疫比濁(immunonephelometry)1、單向免疫擴散（singleimmunodiffusio

4、n）：可溶性抗原在含相應抗體的瓊脂凝膠中進行的擴散，為一種半定量試驗。環(huán)的直徑與抗原含量成正相關2、雙向免疫擴散（douleimmunodiffusion）：抗原與抗體在瓊脂板中相互擴散而形成一定類型的沉淀線的方法。常用于抗原或抗體的定性檢測、組成和兩種抗原相關性分析。3、免疫電泳（immunoelectrophoresis）常用于血清蛋白種類分析，以觀察Ig的異常增多或缺失。1）簡易免疫電泳先將抗原樣品在瓊脂中進行電泳分離，可將蛋白質(zhì)抗原分子分成不同的區(qū)帶，然后將抗血清加入瓊脂板橫槽中，使二者進行雙向擴散，當比例合適時即形成特異性的沉淀線，2）對流免疫電泳(counterimm

5、unoelectrophoresis,CIEP)是將雙向免疫擴散與電泳相結(jié)合的一種技術3）火箭免疫電泳(rocketimmunoelectrophoresis)，抗原在電場下通過含有一定量抗體的瓊脂凝膠，并于抗體發(fā)生反應，形成沉淀帶?？啥糠治?。4、免疫比濁在一定量抗體中分別加入遞增量的抗原，經(jīng)一定時間形成免疫復合物，液體混濁。用濁度計測量反應體系的濁度，可繪制標準曲線并依據(jù)濁度推算樣品中抗原含量。三、補體參與的反應溶菌反應細菌與相應Ab結(jié)合，可激活補體，使細菌溶解。主要發(fā)生于霍亂弧菌等G+菌，可用于細菌鑒定。溶血反應紅細胞與相應抗體結(jié)合，通過激活補體使紅細胞溶解，可作為補體結(jié)合

6、試驗的指示系統(tǒng)。補體結(jié)合反應是一種在補體參與的條件下，以綿羊紅細胞和溶血素作為指示系統(tǒng)來測定有無相應抗原或抗體的血清學試驗。第二節(jié)免疫標記技術免疫標記技術（Immunolabellingtechnique）概念：用熒光素、同位素或酶等示蹤物質(zhì)標記抗體（或抗原）進行抗原-抗體反應。標記物質(zhì)未改變抗原抗體的免疫學特性，同時標記物極大的提高了反應的靈敏度，可以對微量物質(zhì)進行定量、定性或定位檢測。免疫標記技術主要有三種基本類型：免疫熒光技術、免疫酶技術和同位素標記技術。熒光素：異硫氰酸熒光素（黃綠色熒光）、藻紅蛋白、羅丹明（紅色熒光）放射性同位素：125I、131I酶：辣根過氧化物酶、堿

7、性磷酸酶免疫熒光檢測法（IFA）放射免疫檢測法（RIA）酶免疫檢測法（EIA）1．抗體制備。多克隆抗體單克隆抗體，2．標記物與標記方法。放射性同位素、酶、熒光分子、化學和生物發(fā)光系統(tǒng)。免疫分析基本環(huán)節(jié)3．分析方式設計：非競爭方式、競爭方式；直接法、間接法；標記抗原、標記抗體；均相、非均相4.信號檢測。與相應的標記物對應。主要為分光光度法、熒光光度法、化學發(fā)光檢測法。一、免疫熒光法(immunofluorescence,IF)概念：熒光素標記的抗體（抗原）與組織或細胞中的相