《疫學(xué)方法技術(shù)》PPT課件

《《疫學(xué)方法技術(shù)》PPT課件》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。

1、第21章免疫學(xué)方法技術(shù)第一節(jié)基于Ag-Ab反應(yīng)的檢測(cè)方法抗原-抗體反應(yīng)：指抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)、外發(fā)生高度特異性結(jié)合反應(yīng)。由于實(shí)驗(yàn)所用的抗體存在于血清中，故又稱血清學(xué)反應(yīng)（serologicalreaction)用于：抗原（微生物、細(xì)胞、激素、細(xì)胞因子、腫瘤標(biāo)志物等）、抗體的檢測(cè)。特異性抗原抗體反應(yīng)的可見性適當(dāng)?shù)谋壤蜐舛瓤赡嫘钥乖贵w反應(yīng)的特點(diǎn)應(yīng)用1、利用已知抗原檢測(cè)未知抗體（1）檢測(cè)病原微生物的相應(yīng)抗體以輔助診斷疾?。簜?、流行性乙型腦炎、AIDS病等。（2）檢測(cè)自身抗體—診斷自身免疫?。篠LE、類

2、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。2、利用已知抗體檢測(cè)未知抗原（1）鑒定病原菌：診斷疾病（2）檢測(cè)腫瘤相關(guān)抗原：檢測(cè)甲胎蛋白以診斷肝癌（3）檢測(cè)血型抗原、HLA抗原：鑒定血型，親子鑒定（4）檢測(cè)藥物半抗原：確認(rèn)運(yùn)動(dòng)員是否服用興奮劑沉淀反應(yīng)補(bǔ)體參與反應(yīng)中和反應(yīng)2341免疫標(biāo)記凝集反應(yīng)2435Ag-Ab反應(yīng)的基本類型一、凝集反應(yīng)（agglutinationreaction）概念：細(xì)菌、細(xì)胞等顆粒性抗原或包被有抗原的顆粒狀物質(zhì)（如聚苯乙烯乳膠等）與相應(yīng)的抗體結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集團(tuán)，稱為凝集反應(yīng)。1、直接凝集：將細(xì)菌或紅細(xì)胞與相

3、應(yīng)的抗體直接反應(yīng)，出現(xiàn)細(xì)菌凝集或紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。又分為玻片法和試管法。2、間接凝集：將可溶性抗原包被在紅細(xì)胞或乳膠顆粒表面，與相應(yīng)抗體反應(yīng)出現(xiàn)顆粒凝集現(xiàn)象。細(xì)菌的鑒定和血型的檢查檢測(cè)病原體可溶性抗原，病原體感染后產(chǎn)生的抗體二、沉淀反應(yīng)（precipitation）概念：可溶性抗原（免疫球蛋白、細(xì)胞裂解物、組織浸液等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，形成不溶性免疫復(fù)合物，出現(xiàn)不透明的沉淀物。在液體中進(jìn)行出現(xiàn)絮狀沉淀，在半固體瓊脂凝膠上進(jìn)行，形成白色的沉淀。1．單向免疫擴(kuò)散(singleimmunodiffusion)2．雙向

4、免疫擴(kuò)散(doubleimmunodiffusion)3．免疫電泳(immunoelectrophoresis)4．免疫比濁(immunonephelometry)1、單向免疫擴(kuò)散（singleimmunodiffusion）：可溶性抗原在含相應(yīng)抗體的瓊脂凝膠中進(jìn)行的擴(kuò)散，為一種半定量試驗(yàn)。環(huán)的直徑與抗原含量成正相關(guān)2、雙向免疫擴(kuò)散（douleimmunodiffusion）：抗原與抗體在瓊脂板中相互擴(kuò)散而形成一定類型的沉淀線的方法。常用于抗原或抗體的定性檢測(cè)、組成和兩種抗原相關(guān)性分析。3、免疫電泳（imm

5、unoelectrophoresis）常用于血清蛋白種類分析，以觀察Ig的異常增多或缺失。1）簡(jiǎn)易免疫電泳先將抗原樣品在瓊脂中進(jìn)行電泳分離，可將蛋白質(zhì)抗原分子分成不同的區(qū)帶，然后將抗血清加入瓊脂板橫槽中，使二者進(jìn)行雙向擴(kuò)散，當(dāng)比例合適時(shí)即形成特異性的沉淀線，2）對(duì)流免疫電泳(counterimmunoelectrophoresis,CIEP)是將雙向免疫擴(kuò)散與電泳相結(jié)合的一種技術(shù)3）火箭免疫電泳(rocketimmunoelectrophoresis)，抗原在電場(chǎng)下通過(guò)含有一定量抗體的瓊脂凝膠，并于抗體發(fā)生

6、反應(yīng)，形成沉淀帶。可定量分析。4、免疫比濁在一定量抗體中分別加入遞增量的抗原，經(jīng)一定時(shí)間形成免疫復(fù)合物，液體混濁。用濁度計(jì)測(cè)量反應(yīng)體系的濁度，可繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并依據(jù)濁度推算樣品中抗原含量。三、補(bǔ)體參與的反應(yīng)溶菌反應(yīng)細(xì)菌與相應(yīng)Ab結(jié)合，可激活補(bǔ)體，使細(xì)菌溶解。主要發(fā)生于霍亂弧菌等G+菌，可用于細(xì)菌鑒定。溶血反應(yīng)紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體結(jié)合，通過(guò)激活補(bǔ)體使紅細(xì)胞溶解，可作為補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)的指示系統(tǒng)。補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)是一種在補(bǔ)體參與的條件下，以綿羊紅細(xì)胞和溶血素作為指示系統(tǒng)來(lái)測(cè)定有無(wú)相應(yīng)抗原或抗體的血清學(xué)試驗(yàn)。第二節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)

7、免疫標(biāo)記技術(shù)（Immunolabellingtechnique）概念：用熒光素、同位素或酶等示蹤物質(zhì)標(biāo)記抗體（或抗原）進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)。標(biāo)記物質(zhì)未改變抗原抗體的免疫學(xué)特性，同時(shí)標(biāo)記物極大的提高了反應(yīng)的靈敏度，可以對(duì)微量物質(zhì)進(jìn)行定量、定性或定位檢測(cè)。免疫標(biāo)記技術(shù)主要有三種基本類型：免疫熒光技術(shù)、免疫酶技術(shù)和同位素標(biāo)記技術(shù)。熒光素：異硫氰酸熒光素（黃綠色熒光）、藻紅蛋白、羅丹明（紅色熒光）放射性同位素：125I、131I酶：辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶免疫熒光檢測(cè)法（IFA）放射免疫檢測(cè)法（RIA）酶免疫檢測(cè)法

8、（EIA）1．抗體制備。多克隆抗體單克隆抗體，2．標(biāo)記物與標(biāo)記方法。放射性同位素、酶、熒光分子、化學(xué)和生物發(fā)光系統(tǒng)。免疫分析基本環(huán)節(jié)3．分析方式設(shè)計(jì)：非競(jìng)爭(zhēng)方式、競(jìng)爭(zhēng)方式；直接法、間接法；標(biāo)記抗原、標(biāo)記抗體；均相、非均相4.信號(hào)檢測(cè)。與相應(yīng)的標(biāo)記物對(duì)應(yīng)。主要為分光光度法、熒光光度法、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法。一、免疫熒光法(immunofluorescence,IF)概念：熒光素標(biāo)記的抗體（抗原）與組織或細(xì)胞中的相