《疫學(xué)技術(shù)》PPT課件(I)

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1、免疫學(xué)技術(shù)【應(yīng)用于免疫分析】小組成員：吳一帆姚佳祺項(xiàng)衛(wèi)敏免疫學(xué)測(cè)定的中心問題作為免疫反應(yīng)，抗原抗體的選擇是整個(gè)免疫分析特異性和總體表現(xiàn)的關(guān)鍵如何選擇好一個(gè)抗體去檢測(cè)一個(gè)被檢物質(zhì)，而不與非常相似結(jié)構(gòu)的其它物質(zhì)有交叉反應(yīng)，或漏掉須反應(yīng)的物質(zhì)，這是分析設(shè)計(jì)的重中之重抗體的量必須恰當(dāng)，過多會(huì)引起復(fù)合物的溶解關(guān)于抗體的親合力抗體除了要求純度外（單價(jià)特異性）還必須要求親合力，效價(jià)指抗體的量，親合力指抗體的質(zhì)在非競(jìng)爭(zhēng)免疫反應(yīng)的模式中抗體親和力比標(biāo)記物的最低檢測(cè)極限更能影響分析的靈敏度在競(jìng)爭(zhēng)法免疫反應(yīng)的模式中抗體親和力直接關(guān)系到競(jìng)爭(zhēng)的結(jié)果對(duì)于樣

2、品中的干擾物質(zhì),親合力影響分析的抗干擾的能力免疫分析的工作定義免疫分析(Immunoassay)是一種測(cè)試方式,使用特殊的抗體與被檢測(cè)物質(zhì)的結(jié)合,此被檢測(cè)物質(zhì)不能通過簡(jiǎn)單的化學(xué)方法所容易檢測(cè)到的.通常在檢測(cè)系統(tǒng)中會(huì)使用到一種叫標(biāo)記物（labeling）的物質(zhì),常標(biāo)記在抗體上通常會(huì)有一個(gè)分離（separation）的過程在最后讀取信號(hào)前總是需要去仔細(xì)關(guān)注一下分析的模式（format）Access的技術(shù)免疫分析-“what”檢測(cè)技術(shù)–化學(xué)發(fā)光分離技術(shù)–磁性顆粒分析模式–靈活-“how”}分析模式檢測(cè)技術(shù)分離技術(shù)檢測(cè)技術(shù)免疫分析檢測(cè)技

3、術(shù)(Detection)–有許多可用的方法應(yīng)用一些“標(biāo)記物”所產(chǎn)生的一些能量進(jìn)行測(cè)定標(biāo)記物可以或可以不被激活而產(chǎn)生能量通過一些相應(yīng)的檢測(cè)器對(duì)標(biāo)記物產(chǎn)生的能量進(jìn)行測(cè)定分離技術(shù)分析模式放射免疫分析(Radioimmunoassay)優(yōu)勢(shì)優(yōu)秀的靈敏度較寬的檢測(cè)線性范圍局限性標(biāo)記物的半衰期短試劑效期短檢測(cè)結(jié)果的重現(xiàn)性差每次檢測(cè)都要做標(biāo)準(zhǔn)曲線分析的反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，半天~2天發(fā)射性污染有害很難實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化檢測(cè)分離技術(shù)免疫分析檢測(cè)技術(shù)分離技術(shù)(Separation)–有很多方式典型的是,特異性結(jié)合的分析物被保留而未結(jié)合物質(zhì)和無用的反應(yīng)物被清除分析模

4、式技術(shù)的創(chuàng)新微粒子包被珠包被微孔包被管包被磁顆粒包被技術(shù)磁顆?？贵w包被技術(shù)磁顆粒均勻的懸浮于整個(gè)反應(yīng)體系分析物在磁顆粒表面捕獲磁顆粒在磁場(chǎng)中被清洗磁顆粒重新懸浮十分容易優(yōu)勢(shì)快速的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)較少的樣品量提高檢測(cè)的靈敏度極好的批內(nèi)重顯性可以探針取放，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化分析模式免疫分析檢測(cè)技術(shù)分離技術(shù)分析模式-有很多種方式可定義為分析的“處方”設(shè)定一個(gè)最優(yōu)化的模式(可變量)去最優(yōu)化項(xiàng)目的臨床應(yīng)用分析模式可變量夾心法(Sandwich)vs.競(jìng)爭(zhēng)法(competitive)標(biāo)記物的放置同步(Simultaneous)vs.分步(sequenti

5、al)試劑/樣品加入的順序孵育的次數(shù)(步驟)清洗分離的次數(shù)(步驟)試劑/樣品的體積/濃度孵育的時(shí)間孵育的溫度Access的分析模式基本分析模式夾心法(Sandwich)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合(Competitivebinding)試劑的加入，孵育和清洗同步(Simultaneous)(1步,1次清洗)分步(Sequential)(2步,2次清洗)“Piggyback”(2步,1次清洗)夾心法分析模式捕捉抗體(Captureantibody)和標(biāo)記抗體(labeledantibody)每個(gè)不同的抗體可以針對(duì)不同的抗原決定簇，或二個(gè)在同一個(gè)抗原決

6、定簇分析更特異因?yàn)槎€(gè)抗體同時(shí)反應(yīng)適合于檢測(cè)大分子物質(zhì)bhCGTSHIgEProlactinFSHLHFerritinHBsAg競(jìng)爭(zhēng)法分析模式只有捕捉抗體主要針對(duì)小分子物質(zhì)檢測(cè)沒有足夠表面積的分析物去符合“夾心法”要求T3FT3B12DigoxinProgesteroneT4FT4FolateCortisolEstradiol分析模式的選擇需考慮的因素分析物的特征體積（競(jìng)爭(zhēng)法還是夾心法）濃度（一步法，二步法，反應(yīng)時(shí)間等）潛在的“鉤狀效應(yīng)”（hookeffect）-假陰性解決的方法可以使用2步法模式樣品量和試劑量的平衡抗干擾能力儀

7、器的能力／局限性預(yù)處理的要求案例:hLH抗原位點(diǎn)圖BetaAlphaB-D1hTSHhCGB-D2hCGA-D1hCGhFSHhTSHB-D3A-D3A-D2hCGhFSHhTSH抗體的選擇等分子(Equimolar)vs.非等分子(non-equimolar)分析依賴于特異性抗體的選擇結(jié)合模式-一些位點(diǎn)被隱藏游離模式-所有位點(diǎn)都暴露PSAACTPSA嗜異性抗體(HeterophileAntibody)病人樣品中可能自然產(chǎn)生一些針對(duì)動(dòng)物免疫球蛋白的抗體(通常是鼠或羊)來源于暴露于這些動(dòng)物或接受過動(dòng)物血清的治療分析的干擾可以在雙單

8、克隆夾心法分析模式中引起假陽性可以在單克隆/多克隆分析模式中出現(xiàn)假陰性免疫分析設(shè)計(jì)及優(yōu)化開發(fā)免疫分析試劑盒的過程就是選擇并優(yōu)化各種實(shí)驗(yàn)條件，達(dá)到預(yù)期結(jié)果并能準(zhǔn)確反應(yīng)臨床真實(shí)情況的過程抗原/抗體分析模式分離技術(shù)檢測(cè)技術(shù)總體分析表現(xiàn)心肌鈣蛋白和心臟疾病cTnI的水平