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《《蛋白純化系統(tǒng)》PPT課件》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、BioLogicDuoFlow中高壓層析系統(tǒng)層析原理與操作為什么做蛋白質(zhì)純化？原理與操作純度均一的蛋白質(zhì)才能滿足物理化學(xué)性質(zhì)研究、生物活性測定、免疫學(xué)性質(zhì)、結(jié)構(gòu)分析、藥理毒理實驗的要求，以揭示生命科學(xué)的規(guī)律。研究開發(fā)、中試生產(chǎn)蛋白質(zhì)藥物用于診斷和治療。實驗室研究A、天然生物樣品純度均一的蛋白質(zhì)純化B、重組基因工程藥物C、蛋白質(zhì)組研究差異蛋白質(zhì)質(zhì)譜測序克隆表達(dá)分離純化蛋白質(zhì)是生命科學(xué)研究的基本且必要的技術(shù)手段，也是生物制品藥物生產(chǎn)的最重要的工藝步驟！其他生物分子分離純化原理與操作其他生物大分子：DNA，多糖
2、生物小分子：多肽和小肽，核苷酸，寡糖和單糖，多環(huán)和雜環(huán)用途：用于性質(zhì)、活性等研究需要用于治療和診斷的藥物用于生物、化工或食品等輕工領(lǐng)域的生化試劑離心沉淀超濾電泳層析(Chromatography)生物分離純化技術(shù)原理與操作Model491，RotoforNote:蛋白質(zhì)分離純化的重要問題是如何在純化過程中保持溫和的條件，從而保證在此過程中蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和活性不受影響。最廣泛的蛋白質(zhì)分離純化方法條件溫和維持蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)與活性什么是生物層析根據(jù)生物分子物理化學(xué)特性的不同而達(dá)到分離極性：polarity(sol
3、ubility,volatility)HIC,RP離子特性：ioniccharacteristics(charge)IEX大小與形狀：size/mass(diffusion,sedimentation)GF結(jié)構(gòu)特征與活性位點：shape(ligandbinding,affinity)AC這些特性的區(qū)別使不同生物分子分子在層析的固定相和流動相的分配不同而達(dá)到分離原理與操作層析技術(shù)IonExchange(IEX)－離子交換電荷–可用于層析的任何步驟，根據(jù)純度要求，包括粗純捕獲、中間純化和最后的精細(xì)純化Size
4、Exclusion(SEC)－分子篩（或凝膠過濾）分子大小–用于中間純化、脫鹽和緩沖液交換、最后精細(xì)純化Affinity(AC)－親和生物相互作用–用于復(fù)雜樣品的最早捕獲或中間純化HydrophobicInteraction(HIC和RP)－疏水和反相疏水相互作用-用于中間純化，去除脂類和脂多糖CeramicHydroxyapatite(CHT)&CeramicFluoroapatite(CFT)－羥基磷灰石獨特分離機(jī)理，包含離子交換和金屬螯合等,可用于層析的任何步驟，根據(jù)純度要求，包括粗純捕獲、中間純化
5、和最后的精細(xì)純化原理與操作層析的5個操作步驟裝柱并平衡上樣平衡洗脫再生上樣裝填有層析介質(zhì)的層析柱分離分離組分流出原理與操作原理與操作層析圖第一峰,外水體積,Vo,不與柱中填料相互作用直接從柱中流出。這是樣品中的未結(jié)合物質(zhì)VoVeVt蛋白質(zhì)含量(A280),由UV檢測器讀出，y軸基線洗脫峰，有些可以很好的分離，有些分得不是很好，有部分交叉時間或體積，x軸液相層析系統(tǒng)的工作流程用Pump推動溶液…各種Valve系統(tǒng)選取溶液控制流向通過Column時不同蛋白分子與填料作用強度不同因而遷移速度不同從而分開…Col
6、umn洗脫液包含的蛋白….通過檢測器確定位置和濃度FractionCollector收集樣品原理與操作液相層析系統(tǒng)儀器結(jié)構(gòu)DuoFlow10/40系統(tǒng)DuoFlow工作站電導(dǎo)檢測器MX-1梯度混合器AVR7-3樣品進(jìn)樣閥USBBitbus信號轉(zhuǎn)換器液晶顯示器電腦BioFrac方形組分收集器UV檢測器DuoFlow中高壓層析系統(tǒng)Maximizer閥系統(tǒng)QuadTec紫外/可見檢測器Maximizer混合器SV5-4閥AVR9-8閥pH檢測器DuoFlowBasic?DuoFlowQuadTec?Maximi
7、zer?PathfinderDuoFlow中高壓層析系統(tǒng)工作流程DuoFLow生物相容性100%bio-compatible所有接觸溶液的系統(tǒng)以新型塑料peek為主溶液系統(tǒng)不接觸任何金屬件，避免蛋白變性和吸附化學(xué)穩(wěn)定性化學(xué)穩(wěn)定性基本特征DuoFLow兼容所有層析填料基本特征DuoFLowF10梯度泵：20.0ml/minat3500psi(233bar,23MPa)高壓中流速的泵頭可滿足HPLC高壓液相分析和小規(guī)模制備的要求F40梯度泵：80ml/minat1000psi(66bar,6.6MPa)中壓高
8、流速的泵頭可滿足大規(guī)模制備，包括中試和生產(chǎn)的要求DuoFLow特色:可更換的雙泵頭只要旋下泵頭前的4根螺絲，將另一泵頭安上即可實現(xiàn)高壓中流速和中壓高流速的切換DuoFlow可將高壓中流速和中壓高流速兩種儀器的性能通過獨特的泵頭更換技術(shù)整合在一臺儀器中。靈活多樣、功能強大的擴(kuò)展配置DuoFLow特色Easytolearn Software強大的分析、管理和報告功能，通過軟件整合和控制所有硬件:Maximizer,QuadTec,
