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1、蛋白質純化技術蛋白質純化技術鹽析，等電點沉淀透析，超濾凝膠過濾層析離子交換層析親和層析密度梯度離心常用中性鹽：硫酸銨，硫酸鈉，氯化鈉蛋白質純化技術鹽析，等電點沉淀透析，超濾凝膠過濾層析離子交換層析親和層析密度梯度離心蛋白質純化技術蛋白質純化技術切向流過濾?切向流過濾（TangentialFlowFiltration，簡稱TFF）其概念是相對于常規(guī)過濾（NormalFlowFiltration，簡稱NFF）而言的。?切向流過濾則是指液體的流動方向是平行于膜表面的，在壓力的作用下只有一部分的液體穿過濾膜進入下游，這種操
2、作方式也有人稱之為“錯流過濾”（CrossFlowFiltration）。蛋白質純化技術蛋白質純化技術切向流過濾蛋白質純化技術切向流工藝優(yōu)化參數(shù)?切向流流量?跨膜壓（TMP）?透出液控制?膜面積?透析條件蛋白質純化技術具有透過液控制的切向流過濾系統(tǒng)示意圖蛋白質純化技術蛋白質純化技術鹽析，等電點沉淀透析凝膠過濾層析離子交換層析親和層析高壓液相層析密度梯度離心蛋白質純化技術蛋白質純化技術鹽析，等電點沉淀透析凝膠過濾層析離子交換層析親和層析密度梯度離心層析技術?層析分離又稱色譜分離（ChromatographicReso
3、lution,CR）或色層分離。?根據(jù)物理化學性質的差異，使各組分以不同程度分布在兩個相（固定相和流動相）中。?在固定相和流動相之間經(jīng)過多次分配以不同的速率移動，從而達到分離的目的。蛋白質層析技術蛋白質層析技術蛋白質層析技術層析技術基本原理1.吸附層析混合物隨流動相通過固定相（吸附劑）時，由于固定相對不同物質的吸附力不同而使混合物得到分離。2.分配層析其固定相和流動相都是液體，其原理類似于液液萃取，利用混合物中各物質在兩液相中的分配系數(shù)不同而分離。3.凝膠過濾層析由于大分子和小分子在通過色譜柱時，所通過得路徑不同（
4、大分子進入空隙，小分子進入孔內），流出色譜柱的時間不同，從而得到分離。蛋白質層析技術層析技術分類1.按分離機理不同分類吸附層析、分配層析、凝膠過濾層析2.按固定相形狀不同分類柱層析、紙層析、薄層層析3.根據(jù)流動相的物理形態(tài)不同分類氣相層析、液相層析、超臨界層析4.根據(jù)層析分離的規(guī)模大小分類分析型（一次進樣量<10mg）、半制備型（一次進樣量10-50mg）、制備型（一次進樣量0.1-10g）和工業(yè)生產(chǎn)型（>20g/d）凝膠過濾層析（gelchromatography）又稱為凝膠排阻層析、分子篩層析、凝膠層析、凝膠滲
5、透層析等。利用凝膠過濾介質為固定相，根據(jù)物料中溶質相對分子質量的差異的液相色譜法。蛋白質層析技術凝膠特性參數(shù)?排阻極限(exclusionlimit)?分級范圍(Fractionationrange)Sepharose6FastFlow，它的分級范圍為10KD-4000KD?吸水量(Waterregains)?凝膠粒徑Sepharose6FastFlow，它的顆粒大小為45-165um?床體積(Bedvolume)?空隙體積(Voidvolume)蛋白質層析技術蛋白質層析技術凝膠介質的種類?按基質組成主要可以分為：
6、葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠以及由兩種物質混合形成的如瓊脂糖-葡聚糖混合凝膠、聚丙烯酰胺-葡聚糖混合凝膠等。?按凝膠過濾層析能達到的柱效和分辨率又可分為：標準凝膠介質：顆粒尺寸較大（一般為100~250μm），機械強度相對較低高效凝膠介質：顆粒尺寸小（一般為5~50μm），機械強度相對較高，柱效明顯提高，適合于高分辨率或更快的分離。瓊脂糖凝膠由β-D-半乳糖和3,6-脫水-L-半乳糖兩種單糖交替連接而成。其商品名有三種①Sehparose②SepharoseCL③Superose蛋白質層析技術Sephar
7、ose由于沒有交聯(lián)劑的存在，決定凝膠顆粒網(wǎng)孔大小的因素是形成凝膠時瓊脂糖的含量。分離范圍顆粒大小特性/應用Sepharose2BSepharose4BSepharose6BSepharoseFastFlowSepharose6FastFlowSepharose4FastFlow分離顆粒范圍大小特性/應用pH穩(wěn)定性耐壓最高流速（Mpa）(cm/h)蛋白質層析技術SepharoseCLSepharoseCL系列凝膠在顆粒直徑、分級范圍方面與Sepharose系列完全相同在pH穩(wěn)定范圍、機械強度（流速）及溫度穩(wěn)定性等方面
8、得到了很大的改進Superose具有很好的機械穩(wěn)定性、化學穩(wěn)定性及熱穩(wěn)定性，適合于高速分離過程。蛋白質層析技術復合結構凝膠SephacrylHR系列凝膠：是由烯丙基葡聚糖通過N,N′-亞甲基雙丙烯酰胺交聯(lián)而成。Superdex系列凝膠：是將葡聚糖與高交聯(lián)度的瓊脂糖顆粒共價結合而形成的。2334cross-linkedagarosedextrancross-s
