初始污染菌檢查

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1、初始污染菌檢查凌真jennal@126.comTel：13773500977揚州藥品檢驗所藥理室2012-3-30生物學(xué)檢查初始污染菌檢查空氣中細菌總數(shù)檢測方法物體表明和生產(chǎn)人員手細菌總數(shù)檢測方法初始污染菌檢測指標(biāo)含義（！）通過測定檢品細菌總數(shù)可用來判明檢品細菌污染的程度，以及生產(chǎn)單位所用的原料、工具設(shè)備、工藝流程、生產(chǎn)人員的衛(wèi)生狀況，是對檢品進行衛(wèi)生學(xué)評價的綜合依據(jù)。初始污染菌檢測目的：保證滅菌的效果，確定滅菌劑量，監(jiān)控滅菌過程的有效性。引用標(biāo)準(zhǔn)：GB7918.2化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法細菌總數(shù)測定GB15980-1995

2、一次性使用醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國藥典2010版附錄微生物限度檢查法GB7918.2細菌總數(shù)指1g或1ml化妝品（檢品）中所含的活菌數(shù)量，測定細菌總數(shù)可用來判明化妝品（檢品）被細菌污染的程度，以及生產(chǎn)單位所用的原料、工具設(shè)備、工藝流程、操作者（生產(chǎn)工人手細菌總數(shù)）的衛(wèi)生狀況，是對化妝品進行衛(wèi)生學(xué)評價的綜合依據(jù)。GB15980-1995規(guī)定了一次性使用醫(yī)療用品滅菌、消毒前、后的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。對一次性使用醫(yī)療用品（包括滅菌和消毒的一次性使用醫(yī)療用品）生產(chǎn)企業(yè)中生產(chǎn)、裝配、包裝車間（空氣中細菌總數(shù)檢查方法）等生產(chǎn)過程和生產(chǎn)工人手

3、提出衛(wèi)生要求的質(zhì)量控制。檢測環(huán)境和檢驗量在環(huán)境潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向空氣區(qū)域內(nèi)進行。潔凈區(qū)設(shè)置可在微生物室操作各類產(chǎn)品每批隨機抽樣10件樣品（10個包裝）方法主要步驟采樣供試液制備培養(yǎng)菌落計數(shù)初始污染菌檢測采樣方法供試液制備供試品是敷料、可以破壞性類可用無菌手續(xù)稱取10g,放入100ml滅菌生理鹽水中充分振蕩后取樣。作為1：10的供試液。2.供試品是液體取10ml加至100ml滅菌生理鹽水中充分振蕩后取樣。作為1：10的供試液。3.對供試品不能采用破壞性取樣可用浸有無菌生理鹽水拭子涂抹采樣，被采表面積

4、為100cm2.加入滅菌生理鹽水100ml。作為供試液。4.可用破壞性方法取樣供試品：（參照中華人民共和國藥典2010年規(guī)定進行)5.對有內(nèi)腔的醫(yī)療用器:用定量洗脫液，無菌操作沖洗內(nèi)腔，反復(fù)沖洗，充分振落后取樣。6.對一次性輸液（血）器的零配件及其他醫(yī)療器械:直接用定量洗脫液（1ml/10cm2）沖洗，將洗脫液置于無菌容器中，充分振蕩后取樣。初始污染菌檢測梯度稀釋1ml1ml1ml1ml1ml供試液9mlNacl9mlNacl1:101:1001:1000檢驗方法將每樣取5份平行樣（取一份樣品，根據(jù)限值制備好供試液后，取5份

5、1:10，取5份1:100，取5份1:1000，……）初始污染菌檢測結(jié)果計算公式：平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)菌數(shù)菌數(shù)/每件次（或g）=———————————————————件次或重量（g）注意事項：供試品的取樣必須在萬級環(huán)境中100級凈化條件下，無菌操作，防止污染。應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，同時消除抑菌成份的干擾。產(chǎn)品初始污染菌數(shù)限值：滅菌產(chǎn)品管道類內(nèi)腔≤10cfu/件次，外部≤100cfu/件次，非管道類≤100cfu/件次，敷料類≤100cfu/g；消毒產(chǎn)品≤1000cfu/件次或重量（g）初始污染菌檢測供試液制備推薦的制備方法樣品

6、制備供試液制備梯度稀釋加樣用滅菌剪刀將紗布剪成小塊，稱取10g，移入100ml滅菌生理鹽水中，不時振搖。作為1：10供試液。供試液10倍遞減稀釋。盡量避免絲線等雜物的混入。（1）每個稀釋級各吸取1ml至每個滅菌平皿，每個稀釋級注5個平皿。（2）經(jīng)滅菌完畢的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基冷卻至45-50℃時，傾注上述各個平皿15ml，另傾注一個注入1ml稀釋液（滅菌生理鹽水）滅菌空平皿作陰性對照。按一個方向快速轉(zhuǎn)動平皿，使供試液與培養(yǎng)基充分混勻。紗布模擬培養(yǎng)瓊脂凝固后，倒置，37℃培養(yǎng)48h細菌計數(shù)基本概念細菌數(shù)測定是微生物的定量檢查，對非規(guī)

7、定滅菌產(chǎn)品中污染的活菌數(shù)量進行測定，通常以每克或每毫升供試品作為計量單位。限制條件平板菌落計數(shù)法的特點是先使細胞分散、定位，增生可見菌落后計數(shù)。它是一種有條件的計數(shù)法，其限制條件大致如下：⑴以菌落數(shù)為基礎(chǔ)。CFU(colonyformingunits):一個菌落就是一個細菌形成單位，它可以由一個也可以由多個菌細胞形成。⑵受特定培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件限制。⑶有繁殖能力的菌細胞才能認定“活菌”。細菌計數(shù)先用肉眼觀察，點數(shù)菌落數(shù)，然后再用放大5-10倍的放大鏡檢查，以投射光襯以暗色背景，以防遺漏（可輔助菌落計數(shù)器）記下各平皿的菌落數(shù)后，

8、求出同一稀釋度各平皿生長的平均菌落數(shù)（每個稀釋度的5個平板值，相加后除以5）。若平皿中有連成片狀的菌落或花點樣菌落蔓延生長時，該平皿不宜計數(shù)，若片狀菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落數(shù)分布又很均勻，則可將此半個平皿菌落計數(shù)后乘2，以代表全皿菌落數(shù)。菌落特征⑴形態(tài)特征：常為白色、灰白色或