初始污染菌檢查(I)

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1、初始污染菌檢查凌真jennal@126.comTel：13773500977揚(yáng)州藥品檢驗(yàn)所藥理室2012-3-30生物學(xué)檢查初始污染菌檢查空氣中細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)方法物體表明和生產(chǎn)人員手細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)方法初始污染菌檢測(cè)指標(biāo)含義（?。┩ㄟ^測(cè)定檢品細(xì)菌總數(shù)可用來判明檢品細(xì)菌污染的程度，以及生產(chǎn)單位所用的原料、工具設(shè)備、工藝流程、生產(chǎn)人員的衛(wèi)生狀況，是對(duì)檢品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)。初始污染菌檢測(cè)目的：保證滅菌的效果，確定滅菌劑量，監(jiān)控滅菌過程的有效性。引用標(biāo)準(zhǔn)：GB7918.2化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測(cè)定GB15980-1995一次性使用

2、醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國(guó)藥典2010版附錄微生物限度檢查法GB7918.2細(xì)菌總數(shù)指1g或1ml化妝品（檢品）中所含的活菌數(shù)量，測(cè)定細(xì)菌總數(shù)可用來判明化妝品（檢品）被細(xì)菌污染的程度，以及生產(chǎn)單位所用的原料、工具設(shè)備、工藝流程、操作者（生產(chǎn)工人手細(xì)菌總數(shù)）的衛(wèi)生狀況，是對(duì)化妝品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)。GB15980-1995規(guī)定了一次性使用醫(yī)療用品滅菌、消毒前、后的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)一次性使用醫(yī)療用品（包括滅菌和消毒的一次性使用醫(yī)療用品）生產(chǎn)企業(yè)中生產(chǎn)、裝配、包裝車間（空氣中細(xì)菌總數(shù)檢查方法）等生產(chǎn)過程和生產(chǎn)工人手提出衛(wèi)生要求的質(zhì)量控

3、制。檢測(cè)環(huán)境和檢驗(yàn)量在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。潔凈區(qū)設(shè)置可在微生物室操作各類產(chǎn)品每批隨機(jī)抽樣10件樣品（10個(gè)包裝）方法主要步驟采樣供試液制備培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)初始污染菌檢測(cè)采樣方法供試液制備供試品是敷料、可以破壞性類可用無菌手續(xù)稱取10g,放入100ml滅菌生理鹽水中充分振蕩后取樣。作為1：10的供試液。2.供試品是液體取10ml加至100ml滅菌生理鹽水中充分振蕩后取樣。作為1：10的供試液。3.對(duì)供試品不能采用破壞性取樣可用浸有無菌生理鹽水拭子涂抹采樣，被采表面積為100cm2.加入滅菌生理鹽

4、水100ml。作為供試液。4.可用破壞性方法取樣供試品：（參照中華人民共和國(guó)藥典2010年規(guī)定進(jìn)行)5.對(duì)有內(nèi)腔的醫(yī)療用器:用定量洗脫液，無菌操作沖洗內(nèi)腔，反復(fù)沖洗，充分振落后取樣。6.對(duì)一次性輸液（血）器的零配件及其他醫(yī)療器械:直接用定量洗脫液（1ml/10cm2）沖洗，將洗脫液置于無菌容器中，充分振蕩后取樣。初始污染菌檢測(cè)梯度稀釋1ml1ml1ml1ml1ml供試液9mlNacl9mlNacl1:101:1001:1000檢驗(yàn)方法將每樣取5份平行樣（取一份樣品，根據(jù)限值制備好供試液后，取5份1:10，取5份1:100，取5份1:1

5、000，……）初始污染菌檢測(cè)結(jié)果計(jì)算公式：平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)菌數(shù)菌數(shù)/每件次（或g）=———————————————————件次或重量（g）注意事項(xiàng)：供試品的取樣必須在萬(wàn)級(jí)環(huán)境中100級(jí)凈化條件下，無菌操作，防止污染。應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，同時(shí)消除抑菌成份的干擾。產(chǎn)品初始污染菌數(shù)限值：滅菌產(chǎn)品管道類內(nèi)腔≤10cfu/件次，外部≤100cfu/件次，非管道類≤100cfu/件次，敷料類≤100cfu/g；消毒產(chǎn)品≤1000cfu/件次或重量（g）初始污染菌檢測(cè)供試液制備推薦的制備方法樣品制備供試液制備梯度稀釋加樣用滅菌剪刀將紗布剪成小塊

6、，稱取10g，移入100ml滅菌生理鹽水中，不時(shí)振搖。作為1：10供試液。供試液10倍遞減稀釋。盡量避免絲線等雜物的混入。（1）每個(gè)稀釋級(jí)各吸取1ml至每個(gè)滅菌平皿，每個(gè)稀釋級(jí)注5個(gè)平皿。（2）經(jīng)滅菌完畢的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基冷卻至45-50℃時(shí)，傾注上述各個(gè)平皿15ml，另傾注一個(gè)注入1ml稀釋液（滅菌生理鹽水）滅菌空平皿作陰性對(duì)照。按一個(gè)方向快速轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，使供試液與培養(yǎng)基充分混勻。紗布模擬培養(yǎng)瓊脂凝固后，倒置，37℃培養(yǎng)48h細(xì)菌計(jì)數(shù)基本概念細(xì)菌數(shù)測(cè)定是微生物的定量檢查，對(duì)非規(guī)定滅菌產(chǎn)品中污染的活菌數(shù)量進(jìn)行測(cè)定，通常以每克或每毫升供試品

7、作為計(jì)量單位。限制條件平板菌落計(jì)數(shù)法的特點(diǎn)是先使細(xì)胞分散、定位，增生可見菌落后計(jì)數(shù)。它是一種有條件的計(jì)數(shù)法，其限制條件大致如下：⑴以菌落數(shù)為基礎(chǔ)。CFU(colonyformingunits):一個(gè)菌落就是一個(gè)細(xì)菌形成單位，它可以由一個(gè)也可以由多個(gè)菌細(xì)胞形成。⑵受特定培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件限制。⑶有繁殖能力的菌細(xì)胞才能認(rèn)定“活菌”。細(xì)菌計(jì)數(shù)先用肉眼觀察，點(diǎn)數(shù)菌落數(shù)，然后再用放大5-10倍的放大鏡檢查，以投射光襯以暗色背景，以防遺漏（可輔助菌落計(jì)數(shù)器）記下各平皿的菌落數(shù)后，求出同一稀釋度各平皿生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)（每個(gè)稀釋度的5個(gè)平板值，相加后除

8、以5）。若平皿中有連成片狀的菌落或花點(diǎn)樣菌落蔓延生長(zhǎng)時(shí)，該平皿不宜計(jì)數(shù)，若片狀菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落數(shù)分布又很均勻，則可將此半個(gè)平皿菌落計(jì)數(shù)后乘2，以代表全皿菌落數(shù)。菌落特征⑴形態(tài)特征：常為白色、灰白色或