蛙心灌流報(bào)告

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1、生理學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告蛙類離體心臟灌流院系：生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)人：張優(yōu)13941202鄧曉娟13941201（本次實(shí)驗(yàn)報(bào)告由張優(yōu)執(zhí)筆）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)斯氏離體蛙心灌流法。2、了解心肌的生理特性。3、觀察Na+,K+,Ca2+及腎上腺素,乙酰膽堿對離體心臟活動的影響。二、實(shí)驗(yàn)原理（一）兩棲類動物無冠狀循環(huán)兩棲類動物無冠狀循環(huán)，心肌直接從流經(jīng)心腔的血流中獲取營養(yǎng)。即心室肌直接從心室腔中獲得營養(yǎng)。故用任氏液置換心室中的血液后，心室插管中的灌流液便成為心室肌的細(xì)胞外液。（二）心肌對細(xì)胞外離子濃度和體液因數(shù)敏感（三）鉀、鈣和鈉離子對心肌特性的影響1.血鉀濃度過高時(shí)（高于7.9

2、mmol/L），心臟興奮性、自律性、傳導(dǎo)性及收縮性都下降，表現(xiàn)為收縮力減弱、心動過緩和傳導(dǎo)阻滯，嚴(yán)重時(shí)心臟可停搏于舒張期。2.血鈣濃度升高時(shí)，心臟收縮力增強(qiáng)，過高可使心室停搏于收縮期。血鈣濃度降低，心肌收縮力減弱。3.鈉離子濃度的輕微變化，對心肌影響不明顯，只有發(fā)生明顯變化時(shí)，才會影響心肌的生理特性。腎上腺素可使心率加快、傳導(dǎo)加快及心肌收縮力增強(qiáng)，乙酰膽堿則與腎上腺素的作用相反。三、實(shí)驗(yàn)材料青蛙、常用手術(shù)器械、蠟盤、蛙心夾、計(jì)算機(jī)采集系統(tǒng)、張力傳感器、支架、雙凹夾、滴管、小燒杯、紗布、棉線、任氏液、蛙心套管、套管夾、0．65％NaCl、5％NaCI、2％CaC

3、l2、1％KCl、1：5000腎上腺素、1：10000乙酰肌堿、300U／mL肝素。四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）蛙心的解剖1.毀腦毀脊髓2.打開胸腔3.剪開心包膜、暴露心臟（二）斯氏蛙心插管法1.結(jié)扎左主動脈下方穿一線，于動脈圓錐處結(jié)扎。左右兩主動脈下方穿一線，并打一活結(jié)備用。2.插管6生理學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告左主動脈結(jié)扎處下方用眼科剪剪一小切口，將盛有任氏液＋少量肝素的蛙心插管由此口插入主動脈，至動脈圓錐時(shí)約“向后向下向前”試插，當(dāng)心室收縮時(shí)容易經(jīng)主動脈瓣插入心室腔內(nèi)。3.心臟離體穩(wěn)定套管后，輕輕提起備用線，將左、右主動脈連同插入的套管用雙結(jié)扎緊，將結(jié)線固定在套管的小玻璃鉤上，

4、然后剪斷結(jié)扎線上方的血管。輕輕提起套管和心臟，于靜脈竇下方剪斷有牽連的組織，使心臟離體。用任氏液反復(fù)沖洗心室內(nèi)余血，使套管內(nèi)灌流液不再有殘留血液。保持套管內(nèi)液面高度一致2cm。4.支架固定將插好離體心臟的套管固定在支架上，用蛙心夾夾住少許心尖部肌肉。再將蛙心夾上的系線繞過一個(gè)滑輪與張力傳感器相連。張力傳感器與計(jì)算機(jī)采集系統(tǒng)相連。如右圖。（三）實(shí)驗(yàn)觀察操作（1）記錄正常心搏曲線。（2）將蛙心插管0.65％NaCl溶液全部進(jìn)行灌流，液面高度不變，并作好標(biāo)記，觀察用簡單的生理鹽水取代任氏液后心臟活動的變化。待心搏曲線出現(xiàn)明顯變化時(shí)，立即吸去插管中的灌流液，同時(shí)作好沖

5、洗標(biāo)記，并用正常、干凈的任氏液清洗2～3次，待心搏恢復(fù)正?；蚪咏?，并保持穩(wěn)定。（3）在插管內(nèi)正常任氏液的基礎(chǔ)上，加入2滴5%NaCl溶液，作好加藥標(biāo)記，觀察心搏曲線的頻率及振幅的變化。當(dāng)曲線出現(xiàn)明顯變化時(shí)，立即吸去插管中的灌流液，用干凈任氏液清洗3次，待心搏恢復(fù)正?；蚪咏?，并保持穩(wěn)定。（4）向插管內(nèi)加入半滴2%CaCl2溶液，觀察并記錄心搏曲線的變化。當(dāng)出現(xiàn)明顯變化時(shí)，立即更換任氏液（方法同上），清洗，待心搏恢復(fù)正?；蚪咏＃⒈３址€(wěn)定。（5）向插管中加半滴1%KCl溶液，記錄心搏曲線的變化。當(dāng)心搏曲線變化時(shí)，立即同法更換灌流液，清洗，待心搏恢復(fù)正常

6、或接近正常，并保持穩(wěn)定。（6）同法記錄插管中加入半滴1∶5000腎上腺素溶液后心搏曲線的變化。（7）同法記錄插管中加入半滴1∶10000乙酰膽堿溶液后心搏曲線的變化。一、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析1、正常博擊曲線圖6生理學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告方式速度（s/div）靈敏度（g）頻率（Hz）張力23102、滴加0.65%NaCl溶液圖方式速度（s/div）靈敏度（g）頻率（Hz）張力2310滴加0.65%NaCl溶液后，心跳減弱，這是由于用0.65%NaCl溶液灌注蛙心時(shí)，由于灌注液中缺乏Ca2+，以致心肌細(xì)胞動作電位2期內(nèi)流Ca2+減少，細(xì)胞質(zhì)Ca2+濃度減少，心肌的收縮活動也隨之減弱

7、。3.滴加5%NaCl溶液方式速度（s/div）靈敏度（g）頻率（Hz）張力5310　　由于細(xì)胞外液中鈉濃度差梯度的變化一般對心肌活動影響不明顯。因此上圖的心率變化與滴加0.65%NaCl溶液里變化并不是很大，兩個(gè)不同濃度的相同溶液作用機(jī)理是一樣的。但如果實(shí)驗(yàn)中滴加溶液順序不一樣，若先滴加5%NaCl.再滴加0.65%NaCl溶液，所得的心搏變化就不如圖3那樣明顯了，收縮力僅出現(xiàn)很微弱的變化。4.滴加2%CaCl溶液6生理學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告方式速度（s/div）靈敏度（g）頻率（Hz）張力51.510細(xì)胞外Ca2＋在細(xì)胞膜上對Na＋內(nèi)流有競爭性抑制作用，稱為膜屏障作用

8、。[Ca2＋]0增高時(shí)，Na＋內(nèi)流受抑