資源描述：
《《分子克隆技術(shù)》PPT課件》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、分子克隆技術(shù)分子克隆（molecularcloning）又稱為基因克隆、基因工程、DNA克隆、重組DNA技術(shù)克?。–lone）指通過無性繁殖過程所產(chǎn)生的與親代完全相同的子代群體。分子克隆指按照人的意愿，在體外將某種生物的DNA片斷插入到載體（質(zhì)粒、病毒等）中，形成遺傳物質(zhì)的新組合---重組DNA分子（重組子），然后將重組子轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制或表達(dá)，即對(duì)DNA分子進(jìn)行克隆，以獲得該DNA分子的大量拷貝?；驹恚簩⒕幋a某一多肽或蛋白質(zhì)的基因（外源基因）組裝到細(xì)菌質(zhì)粒（質(zhì)粒是細(xì)菌染色體外的雙鏈環(huán)狀DNA分子）中，再將重組質(zhì)粒
2、轉(zhuǎn)入大腸桿菌，這樣重組質(zhì)粒就隨大腸桿菌的增殖而復(fù)制，從而克隆基因或表達(dá)出外源基因編碼的相應(yīng)多肽或蛋白質(zhì)。Asaresultofthiswork,PaulBergsharedthe1980NobelPrizeinChemistrywithWalterGilbertandFrederickSanger"forfundamentalstudiesofthebiochemistryofnucleicacids,withparticularregardtorecombinant-DNA."AtStanfordBergandhiscoll
3、eaguessplicedtwoDNAmoleculestogetherinvitroandwereabletoinsertasetofthreegenesresponsibleformetabolizinggalactoseinEscherichiacoliintotheSV40DNAgenome.ThisworkledtotheemergenceofrecombinantDNAtechnologyandprovidedamajortoolforanalyzingmammaliangenestructureandfuncti
4、on.大腸桿菌轉(zhuǎn)化體系的建立：感受態(tài)菌制備經(jīng)氯化鈣處理的大腸桿菌能夠攝取質(zhì)粒DNA。1.雙抗性（TerKar)重組質(zhì)粒DNA及雙抗性轉(zhuǎn)化大腸桿菌細(xì)胞的獲得。2.真核動(dòng)物非洲爪蟾的基因在原核細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄意義：1.解決了無復(fù)制能力的DNA片斷在宿主細(xì)胞中進(jìn)行繁殖克隆的關(guān)鍵問題；2.質(zhì)粒分子可作為基因克隆的載體將外源DNA分子導(dǎo)入宿主細(xì)胞；3.真核細(xì)胞的基因可被轉(zhuǎn)移到原核細(xì)胞中進(jìn)行克隆及表達(dá)。分子克隆中的關(guān)鍵技術(shù)：DNA分子的分離和富集技術(shù)；DNA分子的切割與連接技術(shù)；載體構(gòu)建技術(shù)；大腸桿菌轉(zhuǎn)化技術(shù)；重組DNA分子的篩選和鑒定技術(shù)分子
5、克隆的基本步驟：1.目的基因的獲得2.目的基因與載體的連接3.重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞4.篩選出含重組DNA分子的受體細(xì)胞克隆5.克隆基因、克隆基因的表達(dá)載體特征：1.能自主復(fù)制的復(fù)制子2.可供篩選的遺傳標(biāo)記3.適當(dāng)大小的分子量4.合適的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)，方便外源基因的插入5.在受體細(xì)胞中高效復(fù)制TA克隆的idea最初來自1994年。幾位學(xué)者發(fā)現(xiàn)TaqDNA聚合酶在PCR產(chǎn)物的3`末端加上一個(gè)脫氧腺苷（A），而且這種特性與模板無關(guān)。之后，invitrogen公司發(fā)明了TA克隆技術(shù)，并擁有全球TAcloning商標(biāo)的專利權(quán)。線
6、性化的T載體在3`末端擁有一個(gè)脫氧胸苷（T），與PCR產(chǎn)物的A尾巴互補(bǔ)。工具酶篩選標(biāo)記抗生素抗性篩選藍(lán)白篩選：lacZ基因β-半乳糖苷酶α互補(bǔ)
