實驗2分離以尿素為氮源的微生物

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1、實驗2分離以尿素為氮源的微生物一.實驗原理尿素NH3中性堿性酚紅顏色：(酸性)黃色紅色(變色范圍pH6.4-8.2)二.實驗目的使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基分離細菌(有脲酶)通過指示劑（酚紅）顏色的變化檢知培養(yǎng)基pH的變化(脲酶催化的化學反應)三.實驗步驟２.倒平板３.制備一定濃度梯度的細菌懸液１g土壤＋９９ml無菌水，振蕩，為１０-2稀釋液，依次制備１０-3、１０-4、１０-5的土壤稀釋液。４.稀釋涂布分離法分離細菌１.制備無菌的ＬＢ固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基P26５.培養(yǎng)觀察（倒置，37℃24-48h）（無菌，0.1ml，玻璃刮刀）配制培養(yǎng)基

2、尿素培養(yǎng)基葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g瓊脂糖0.5g酚紅0.25g尿素10mlLB培養(yǎng)基蛋白胨：0.25g酵母提取液：0.12gNaCl：0.25g瓊脂糖：0.5g對照組選擇培養(yǎng)基實驗組為什么用瓊脂糖代替瓊脂？怎么獲得無菌的尿素溶液？接種取0.1ml菌懸液涂布分離涂布分離37℃倒置培養(yǎng)按濃度捆成一摞恒溫37℃培養(yǎng)1、為什么要用瓊脂糖代替瓊脂配置固體培養(yǎng)基因為瓊脂是未被純化的混合物，內含一定量的含氮化合物。如果用瓊脂固化培養(yǎng)基，會為細菌提供一定量的非尿素類氮源，這樣會在尿素固體培養(yǎng)上產生大量以非尿素為氮源的細菌，不利于

3、以尿素為氮源的細菌的篩選，故用純化的瓊脂糖而不用瓊脂做固化劑思考題：2、有脲酶的細菌在生態(tài)穩(wěn)態(tài)上起什么作用土壤中的尿素在較高溫度下會被水解成氨，氨使土壤堿化，氨還與SO42-等離子形成化合物，使土壤板結。而脲酶的細菌不僅使動植物尸體降解，而且利用了所形成的氨，有利于自然界中氮的循環(huán)。3、有脲酶的細菌菌落周圍為什么有著色的環(huán)帶出現(xiàn)。細菌向胞外分泌脲酶，使培養(yǎng)基中尿素水解，水解后產生氨，氨為堿性，酚酞在酸性環(huán)境里呈黃色，堿性里呈紅色。培養(yǎng)基中酸堿指示劑產生顏色變化（變紅），標志著存在脲酶水解尿素的作用，從而證明這一菌株以尿素為氮源。4、與全營養(yǎng)培養(yǎng)基

4、上的菌落數比較，為什么尿素培養(yǎng)基上只有少數菌落表明能利用尿素的細菌在土壤菌落中只占有極少數。5.本實驗分離出來的細菌一定都是以尿素為氮源的細菌嗎？不一定，有些細菌能利用其它微生物的代謝產物。