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1、實驗分離以尿素為氮源的微生物脲，又稱尿素，CNH2NH2O是蛋白質(zhì)的降解產(chǎn)物，會污染環(huán)境，但可以被含脲酶的微生物分解。實驗原理：⑴含有脲酶的細菌可以從尿素中得到源，而其他細菌不能得到源，因此可以用以尿素為唯一源的培養(yǎng)基選擇出這些微生物。⑵尿素在脲酶的降解下產(chǎn)生，使培養(yǎng)基的變?yōu)閴A性，酚紅遇堿由紅黃色變成紅色，因此可以用酚紅鑒定。(NH2)2C=O+H2O2NH3+CO2脲酶選擇培養(yǎng)基全營養(yǎng)培養(yǎng)基尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基土壤稀釋液（多種微生物）結(jié)果如何？設備及用品：實驗材料：()全營養(yǎng)固體培養(yǎng)基：蛋白胨、酵母提取物、、瓊脂糖、加水。()尿素固體培養(yǎng)基：葡
2、萄糖、、、酚紅、瓊脂糖、加水。滅菌冷卻到℃時加入經(jīng)玻璃漏斗過濾（使其無菌）的尿素溶液（內(nèi)含脲）。）土樣。.酚紅的作用是什么？.凝固劑為什么使用瓊脂糖，而不是瓊脂？.能否連同尿素一起進行滅菌？如何操作？瓊脂是未被純化的混合物，內(nèi)含一定量的含氮化合物實驗步驟：觀察注意：尿素經(jīng)過玻璃漏斗過濾后加入培養(yǎng)基的配制和滅菌倒平板接種全營養(yǎng)固體培養(yǎng)基（對照組）尿素固體培養(yǎng)基（實驗組）玻璃刮刀、涂布分離培養(yǎng)對照組：實驗組：制備細菌懸液倒置，℃恒溫培養(yǎng)箱，左右菌落數(shù)量和種類多而雜菌落少、單一，菌落周圍出現(xiàn)紅色區(qū)域制備細菌懸液：的無菌水的無菌水土壤4.5ml無菌水0.5
3、ml0.5ml0.5ml土樣無菌水微量移液器的使用培養(yǎng)基上、稀釋液涂布結(jié)果尿素培養(yǎng)基上、稀釋液涂布結(jié)果℃恒溫培養(yǎng)注意事項①為使結(jié)果接近真實值可將同一稀釋度加到三個或三個以上的平皿中，經(jīng)涂布，培養(yǎng)計算出菌落平均數(shù)。②涂布平板法所選擇的稀釋度很重要，一般取三個稀釋度③同一稀釋倍數(shù)的三個重復的菌落數(shù)相差較大，表明試驗不精確，需要重新實驗。微生物的培養(yǎng)與觀察稀釋涂布平板法可用于測定活菌數(shù)：每克樣品中的菌落數(shù)＝(÷)×其中，代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，代表涂布平板時所用的稀釋液的體積()，代表稀釋倍數(shù)。例如若某同學將毫升的菌液稀釋成倍，涂布分離后
4、，個平板的菌數(shù)依次為：個，個，個。請問，你能算出該試管中的細菌數(shù)大約是多少嗎？實例：在做分解尿素的細菌的篩選與統(tǒng)計菌落數(shù)目的實驗時，同學從對應的倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約個菌落，但是其他同學在同樣的稀釋度下只選擇出大約個菌落。分析其原因。原因：⑴土樣不同，⑵培養(yǎng)基污染或操作失誤(或者是混入了其他的含氮物質(zhì))例：根據(jù)分離以尿素為氮源的微生物實驗，回答下列問題：⑴寫出脲酶降解尿素的反應式；⑵該實驗分離細菌時用濃度為和土壤稀釋接種，更容易形成單菌落的.⑶同學篩選出的菌落為個，其他同學只選擇出個，并且他在設計實驗時并沒有設置對照。你認為同學結(jié)果產(chǎn)生的原因可
5、能有哪些如何設計對照實驗排除可能影響實驗結(jié)果的因素：⑷涂布平板的所有操作怎樣保證無菌？()脲酶土壤稀釋可能是土樣不同，也可能是培養(yǎng)基污染或操作失誤一是由其他同學用與同學一樣的土壤進行實驗，如果與同學一致則證明無誤。如果不同，則證明同學存在操作或培養(yǎng)基配制配制有問題。二是將同學配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。從操作的各個細節(jié)保證“無菌”，都應在火焰旁進行。小結(jié)：通過這個事例可以看出，實驗結(jié)果要有說服力，對照的設置是必不可少的。方案一：由其他同學用與同學相同土樣進行實驗方案二：將同學配制的培養(yǎng)基在不加土樣
6、的情況下進行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。結(jié)果預測：如果結(jié)果與同學一致，則證明無誤；如果結(jié)果不同，則證明同學存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。顏色：預期：酚紅由黃變紅。說明有分解尿素的細菌存在，且隨著培養(yǎng)時間的延長，紅色區(qū)域的面積越來越大。中性堿性細菌黃色紅色酚紅：酸堿指示劑，變色范圍：pH6.4—8.2
