藥物半數(shù)致死量-LD50的測定jy

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1、藥物半數(shù)致死量(LD50)的測定吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)系毒性試驗特殊毒性試驗（致畸、致癌、致突變）長期（慢性）毒性試驗急性毒性試驗：1～7d半數(shù)致死量（lethaldose50%,LD50）：是指能夠引起試驗動物一半死亡的藥物劑量，通常用藥物致死劑量的對數(shù)值表示。測定LD50意義(1)是衡量藥物毒性大小的指標(biāo)，評價藥物優(yōu)劣的重要參數(shù)(2)評價藥物安全性---治療指數(shù)(3)申報新藥過程中必須提供的藥理學(xué)資料TI=LD50/ED50新藥審批辦法規(guī)定：三、藥理資料13.與功能主治有關(guān)的主要藥效學(xué)試驗資料及文獻(xiàn)資料。14.一般藥理研究的

2、試驗資料及文獻(xiàn)資料。15.動物急性毒性試驗資料及文獻(xiàn)資料。16.動物長期毒性試驗資料及文獻(xiàn)資料。17.致突變試驗資料及文獻(xiàn)資料。18.致癌試驗資料及文獻(xiàn)資料。19.生殖毒性試驗資料及文獻(xiàn)資料。鹽酸普魯卡因產(chǎn)生毒性作用的原理:鹽酸普魯卡因是一種局部麻醉藥，當(dāng)被大量吸收后會產(chǎn)生全身性毒性反應(yīng)，主要表現(xiàn)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)先興奮后抑制，初期表現(xiàn)為眩暈、煩躁不安、肌肉震顫，進(jìn)而發(fā)展為神經(jīng)錯亂、驚厥、昏迷、呼吸抑制等?；颊呖梢蚝粑ソ叨劳?。LD50的測定方法有很多。如：目測機率單位法、加權(quán)機率單位法(Bliss法)、寇氏法、序貫法等。Bliss法

3、是目前推薦使用的方法。此法對劑量分組無嚴(yán)格要求，不需要劑量組有0%和100%死亡率，是目前公認(rèn)最準(zhǔn)確的測定方法。但本法計算繁瑣，故現(xiàn)多采用計算機程序計算。我國衛(wèi)生部規(guī)定，Bliss法是作為新藥LD50測定評定必須采用的方法。實驗部分【實驗?zāi)康摹?.掌握藥物的半數(shù)致死量測定的意義、方法、計算過程。2.了解藥物給藥后動物所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及其嚴(yán)重程度。【實驗材料】實驗動物：小白鼠，體重18～２２g，♀♂各半，實驗前禁食12h,不禁水。實驗器材：計算機（BL-410機能實驗系統(tǒng)）、電子秤、注射器、小鼠籠。實驗藥品：鹽酸普魯卡因（Procai

4、nehydrochloride）【實驗步驟】預(yù)備實驗1．探索劑量范圍：根據(jù)經(jīng)驗或文獻(xiàn)，通過實驗找出100%死亡的最小劑量及0%死亡的最大劑量。此即上下限劑量（Dm，Dn）。2．確定組數(shù)、計算各組劑量：組數(shù)（n）：5組按公式求公比r:按公比求各組劑量：D1，D2，…,Dn，其中D1=Dn=最小劑量、D2=D1·r,…，Dn=Dn-1·r,Dm3．配制等比稀釋溶液：要求各小鼠給藥容積一樣，一般0.1ml/10g，按下列公式計算濃度：r=1.25藥液配制的具體步驟：預(yù)試中Dm=344mg/kg，Dn=141mg/kg，算出r=1.25，小

5、鼠的平均體重為20g，每組10只，用藥量為0.1ml/10g=10ml/kgC1=344mg/kg/10ml/kg=34.4mg/ml每組藥液量=每組動物總重×用藥量=200g×0.1ml/10g=2ml1號2號3號4號5號1號液2號液3號液4號液5號液2ml2ml2ml2ml2ml【實驗步驟】正式實驗1．分組編號:取小鼠50只，隨機分成5組，每組10只，♀♂各半。2．計算給藥：由腹腔注射給藥。3．觀察記錄：記錄小鼠給藥后反應(yīng)，死亡時間，統(tǒng)計死亡數(shù)，列下表：結(jié)果記錄表組別劑量（ml/10g）動物數(shù)（只）死亡數(shù)（只）死亡率（%）123

6、450.120.110.100.0910.0821010101010小鼠的腹腔注射方法抓好后將小鼠保持頭低位4.實驗觀察30min后進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計5.計算LD50及其95%可信限采用Bliss法程序計算各參數(shù)步驟：啟動微機，運行BL-410程序，進(jìn)入其數(shù)據(jù)處理選項，再進(jìn)入半數(shù)有效量選項。一次輸入各組劑量、動物總數(shù)、動物死亡數(shù)等相關(guān)數(shù)據(jù)。單擊“計算”按鈕，計算LD50等參數(shù)?！咀⒁馐马棥拷o藥劑量準(zhǔn)確小鼠腹腔注射脫臼處死實驗用過小鼠【思考題】1.測定LD50有何藥理意義？2.為何選擇測定LD50作為衡量藥物毒性大小的指標(biāo)?實驗結(jié)束各組將實

7、驗臺和實驗器材刷洗干凈