沙門氏菌檢測(cè)

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1、沙門氏菌檢測(cè)1設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：1.1冰箱：2℃～5℃。1.2恒溫培養(yǎng)箱：36℃±1℃，42℃±1℃。1.3均質(zhì)器。1.4振蕩器。1.5電子天平：感量0.1g。1.6無(wú)菌錐形瓶:容量500ml，250ml。1.7無(wú)菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸頭。1.8無(wú)菌培養(yǎng)皿：直徑90mm。1.9無(wú)菌試管：3mm×50mm、10mm×75mm。1.10無(wú)菌毛細(xì)管。1.11pH計(jì)或pH比色管或精密pH試紙。1.12全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)。2培養(yǎng)基和試劑2.1緩沖蛋白胨水（

2、BPW）：見(jiàn)附錄中1。2.2四硫磺酸鈉煌綠（TTB）增菌液：見(jiàn)附錄中2。2.3亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液：見(jiàn)附錄中3。2.4亞硫酸鉍（BS）瓊脂：見(jiàn)附錄中4。2.5HE瓊脂：見(jiàn)附錄中5。2.6木糖賴氨酸脫氧膽鹽（XLD）瓊脂：見(jiàn)附錄中6。2.7沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基。2.8三糖鐵（TSI）瓊脂：見(jiàn)附錄中7。2.9蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑：見(jiàn)附錄中8。2.10尿素瓊脂（pH7.2）：見(jiàn)附錄中9。2.11氰化鉀（KCN）培養(yǎng)基：見(jiàn)附錄中10。2.12賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基：見(jiàn)附錄中11。2.13糖發(fā)酵管：見(jiàn)附錄中12。2.14鄰硝基酚β-D半乳糖苷（ONPG）培養(yǎng)基

3、：見(jiàn)附錄中13。2.15半固體瓊脂：見(jiàn)附錄中14。2.16丙二酸鈉培養(yǎng)基：見(jiàn)附錄中15。2.17沙門氏菌O和H診斷血清。2.18生化鑒定試劑盒。3操作方法3.1試驗(yàn)前準(zhǔn)備3.1.1將供試品及所有已滅菌的平皿、錐形瓶、勻漿杯、試管、量筒、吸管（1ml、10ml）、稀釋劑等移至操作室內(nèi)。準(zhǔn)備好足夠用量，避免操作中出入操作間。3.1.2開(kāi)啟無(wú)菌室紫外殺菌燈和潔凈工作臺(tái)的空氣過(guò)濾裝置30min。3.1.3操作人員用肥皂洗手，關(guān)閉紫外殺菌燈，進(jìn)入緩沖間，換工作鞋，用消毒液洗手或用乙醇棉球擦手，穿戴好無(wú)菌衣、帽、口罩、手套等。?3.1.4操作前先用乙醇棉球擦手、工作臺(tái)面

4、，再用乙醇棉球擦拭供試品瓶、盒、袋等的開(kāi)口處周圍，待干后用滅菌剪刀或鑷子將供試品啟封。?3.2前增菌稱取25g（ml）樣品放入盛有225mlBPW的無(wú)菌均質(zhì)杯中，以8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，或置于盛有225mlBPW的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min。若樣品為液態(tài)，不需要均質(zhì)，振蕩混勻。如需測(cè)定pH值，用1mol/ml無(wú)菌NaOH或HCl調(diào)pH至6.8±0.2。無(wú)菌操作將樣品轉(zhuǎn)至500ml錐形瓶中，如使用均質(zhì)袋，可直接進(jìn)行培養(yǎng)，于36℃±1℃培養(yǎng)8h～18h。如為冷凍產(chǎn)品,應(yīng)在45℃以下不超過(guò)15min

5、,或2℃～5℃不超過(guò)18h解凍。3.3增菌輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)過(guò)的樣品混合物，移取1ml，轉(zhuǎn)種于10mlTTB內(nèi)，于42℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。同時(shí)，另取1ml，轉(zhuǎn)種于10mlSC內(nèi)，于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。3.4分離分別用接種環(huán)取增菌液1環(huán)，劃線接種于一個(gè)BS瓊脂平板和一個(gè)XLD瓊脂平板（或HE瓊脂平板或沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）。于36℃±1℃分別培養(yǎng)18h～24h（XLD瓊脂平板、HE瓊脂平板、沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）或40h～48h（BS瓊脂平板），觀察各個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落。各個(gè)平板上的菌落特征見(jiàn)表1。表1沙門氏菌屬在不同選擇性瓊脂平板上的菌

6、落特征選擇性瓊脂平板沙門氏菌BS瓊脂菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變。HE瓊脂藍(lán)綠色或藍(lán)色，多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑色；有些菌株為黃色，中心黑色或幾乎全黑色。XLD瓊脂菌落呈粉紅色，帶或不帶黑色中心，有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心，或呈現(xiàn)全部黑色的菌落；有些菌株為黃色菌落，帶或不帶黑色中心。沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基按照顯色培養(yǎng)基的說(shuō)明進(jìn)行判定。3.5生化試驗(yàn)3.5.1自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個(gè)以上典型或可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂，先在斜面劃線，再于底層穿刺；接種針不要滅菌,直接接種

7、賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h，必要時(shí)可延長(zhǎng)至48h。在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基內(nèi)，沙門氏菌屬的反應(yīng)結(jié)果見(jiàn)表2。表2沙門氏菌屬在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基內(nèi)的反應(yīng)結(jié)果三糖鐵瓊脂賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基初步判斷斜面底層產(chǎn)氣硫化氫KA＋(－)＋(－)＋可疑沙門氏菌屬KA＋(－)＋(－)－可疑沙門氏菌屬AA＋(－)＋(－)＋可疑沙門氏菌屬AA＋/－＋/－－非沙門氏菌KK＋/－＋/－＋/－非沙門氏菌注：K：產(chǎn)堿，A：產(chǎn)酸，＋：陽(yáng)性，－：陰性；＋(－)多數(shù)陽(yáng)性，少數(shù)陰性；＋/－：陽(yáng)性或陰性。3.5.2接種三糖鐵瓊

8、脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基的同時(shí),可直接接種蛋白胨水