沙門氏菌檢測方法研究進展

《沙門氏菌檢測方法研究進展》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、沙門氏菌檢測方法研究進展摘要：沙門氏菌是一種重要的人畜共患病原菌，能夠污染多種食物，引起嚴重的食品安全問題，因此，建立一種快速而準(zhǔn)確的檢測方法一直是沙門氏菌檢驗研究的核心問題。本文對近年來沙門氏菌的檢測進展進行了簡單的介紹。關(guān)鍵詞：沙門氏菌；檢測方法；研究進展沙門氏菌是革蘭氏陰性、細胞內(nèi)寄生的一種腸道菌。該菌廣泛存在于自然界中，不但能引起家畜家禽及其他動物發(fā)生急性、慢性或隱性感染，而且還能通過污染食物導(dǎo)致人的食物中毒，對人類造成很大的威脅。在世界各國的各類細菌性食物中毒中，沙門氏菌引起的食物中毒常居榜首。在英

2、國，就以沙門氏菌為首位，美國則為第二位。我國內(nèi)陸地區(qū)以沙門氏菌為首位。世界上最大的一起沙門氏菌食物中毒是1953年于瑞典由于豬肉引起的鼠傷寒沙門氏菌中毒，7717人中毒，90人死亡[1]。沙門氏菌菌型繁多，已確認的沙門氏菌有2500個以上血型。因此，沙門氏菌的檢測一直是沙門氏菌研究的核心問題。為了尋求快速、準(zhǔn)確、簡便、微量的檢測技術(shù)和方法，國內(nèi)外學(xué)者進行了大量的研究，從以傳統(tǒng)方法為基礎(chǔ)發(fā)展到以免疫學(xué)為基礎(chǔ)的或以分子生物學(xué)為基礎(chǔ)的快速檢測方法，并在實踐中不斷取得新進展。下面就對沙門氏菌的檢測方法進行簡單的介紹。

3、1傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)檢測方法用于檢測沙門氏菌的傳統(tǒng)方法是將食物樣品分步增菌，以增加病原菌的檢出率。這種培養(yǎng)方法總體可分為三個不同階段，預(yù)增菌、選擇性增菌及分離步驟。傳統(tǒng)沙門氏菌檢測法全過程需時至少4–7d，才能得出明確的診斷結(jié)果。GB4789.4–94是目前我國規(guī)定的對畜產(chǎn)品中沙門氏菌的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，主要是根據(jù)沙門氏菌的生化特性，進行前增菌、選擇性增菌、分離培養(yǎng)、生化鑒定和血清分型五個步驟[2]。在檢測畜產(chǎn)品過程中，應(yīng)注意根據(jù)不同的樣品采取不同的檢測步驟。2免疫學(xué)方法免疫學(xué)技術(shù)是以抗原和抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)，再輔

4、以免疫放大技術(shù)來鑒別細菌，通過病原體刺激機體產(chǎn)生免疫球蛋白(抗體)的方法。由于免疫法有較高靈敏度，樣品經(jīng)增菌后可在較短的時間內(nèi)檢出，抗原和抗體的結(jié)合反應(yīng)可在很短時間內(nèi)完成。因此免疫學(xué)法在食品微生物檢測中應(yīng)用廣泛。2.1酶聯(lián)免疫吸附1977年，Kryinski與Heimsch首次將酶聯(lián)免疫吸附測定法(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay,簡稱ELISA)用于食品沙門氏菌的檢測。相繼許多學(xué)者都利用ELISA進行食品沙門氏菌的檢測，但他們使用的多價抗血清不同程度地存在交叉反應(yīng)，使ELISA產(chǎn)

5、生假陽性，在實踐中有一定困難。上世紀80年代，單克隆抗體技術(shù)問世并日趨成熟，建立了抗沙門氏菌各種O抗原、H抗原單抗，取代常規(guī)因子血清進行血清學(xué)鑒定、傷寒診斷、雞白痢檢疫，并顯示出單抗卓越的性能。我國焦新安等應(yīng)用淋巴細胞雜交瘤技術(shù)獲得了4株具有沙門氏菌廣譜結(jié)合特性的單克隆抗體，其中兩株的反應(yīng)互補，對已檢菌株覆蓋率達99％，而對其它受試腸桿菌均無交叉反應(yīng)。文其乙等在前人基礎(chǔ)上應(yīng)用沙門氏菌屬特異性單克隆抗體CB8和de7建立了檢測沙門氏菌的直接ELISA方法，并形成了快速檢測試劑盒，此外，還應(yīng)用直接ELISA方法對

6、500份蛋品檢測，結(jié)果表明該方法可靠，且陽性率比國標(biāo)方法高。黎兆滾等使用ELISA技術(shù)，對94份魚粉樣品增菌培養(yǎng)液檢測沙門氏菌，結(jié)果表明陽性符合率為92％，陰性符合率為100％，總符合率98％以上[3]。2.2斑點酶聯(lián)免疫吸附斑點酶聯(lián)免疫吸附(Dot–ELISA)試驗是一項免疫學(xué)檢測技術(shù)，具有簡單、快速、敏感、特異性強等特點，并具有較高的可重復(fù)性。目前，應(yīng)用該法檢測食品中沙門氏菌的報道很多。張紅見等應(yīng)用Dot–ELISA法對85份豬胴體進行了沙門氏菌的檢測。結(jié)果表明，在85份肉樣中，Dot–ELISA檢出沙門

7、氏菌陽性65份，陽性率為76.47％，檢測結(jié)果與常規(guī)方法一致。雷風(fēng)應(yīng)用Dot–ELISA法檢測魚粉85份，對沙門氏菌最低檢出量為每毫400個，沙門氏菌陽性檢出率75.29％，常規(guī)分離培養(yǎng)法陽性檢出率為62.35％，兩者差異不顯著?？得鞯葢?yīng)用Dot–ELISA檢測魚粉85份，結(jié)果表明，64份為陽性，常規(guī)分離培養(yǎng)法53份為陽性，兩種方法差異不顯著。由此可見，該方法簡便、特異、快速、結(jié)果直觀，便于在基層推廣使用[4]。2.3斑點免疫金滲濾法斑點免疫金滲濾法(dot–immunogoldfiltrationassay

8、,DIGFA)是20世紀80年代初發(fā)展起來的一種以膠體金為標(biāo)記物的快速免疫結(jié)合分析技術(shù)，它借助酶聯(lián)免疫原理，使點在硝酸纖維膜上的樣品與膠體金標(biāo)記的兔抗沙門氏菌抗體結(jié)合，若樣品中含有沙門氏菌，與膠體金標(biāo)記的兔抗沙門氏菌抗體結(jié)合，形成金標(biāo)抗原抗體復(fù)合物，滯留在硝酸纖維膜上并顯色，可得到直觀的檢測結(jié)果，該法具有與酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)相同的特異性，且操作簡便、快速，不需特殊儀器設(shè)備和操作技能。2.