資源描述：
《食品沙門氏菌檢測方法進(jìn)展論文》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、食品沙門氏菌檢測方法進(jìn)展論文沙門氏菌病是公共衛(wèi)生學(xué)上具有重要意義的人畜共患病之一，其病原沙門氏菌屬腸道細(xì)菌科，包括那些引起食物中毒，導(dǎo)致胃腸炎、傷寒和副傷寒的細(xì)菌。它們除可感染人外，還可感染很多動物包括哺乳類、鳥、爬行類、魚、兩棲類及昆蟲。人畜感染后可呈無癥狀帶菌狀態(tài)，也可表現(xiàn)為有臨床癥狀的致死疾病，它可能加重病態(tài)或死亡率，或者降低動物的繁殖生產(chǎn)力。蛋、家禽和肉類產(chǎn)品是沙門氏菌病的主要傳播媒介.freelonelletest1)對進(jìn)出口動物產(chǎn)品(魚粉、肉骨粉等)進(jìn)行沙門氏菌檢測。該法采用預(yù)先包被了沙門氏菌(A-E群)單克隆抗體的微量板，加入經(jīng)增菌處理
2、的樣品，反應(yīng)后再加入一定的指示劑，作用畢后用酶標(biāo)儀測定OD值來判定結(jié)果。食物樣品經(jīng)適當(dāng)?shù)脑鼍幚?，也可用此法進(jìn)行沙門氏菌檢測。ELISA法檢出沙門氏菌的極限范圍在105～106個細(xì)胞/ml，因此，要得出可靠的結(jié)果，食物樣品首先必需進(jìn)行預(yù)增菌、選擇性增菌，通常還要在含有D-甘露糖的肉湯(M肉湯)中進(jìn)行后增菌，以促進(jìn)鞭毛發(fā)育?？偟膩碚f，標(biāo)準(zhǔn)的ELISA法樣品的制備，約需要經(jīng)過40～48h的孵育才能完成。黎兆滾等人的微量板ELISA法(Salmonellatest1)樣品制備過程分三步，共耗時24h：①選用營養(yǎng)肉湯進(jìn)行預(yù)增菌(6h)，使“致傷”、冷凍的沙門
3、氏菌復(fù)蘇。②使用選擇性培養(yǎng)基RV進(jìn)行增菌(14h)，使沙門氏菌大量繁殖，同時抑制其它雜菌生長。③使用營養(yǎng)肉湯(蛋白胨水)進(jìn)行后增菌(4h)，使沙門氏菌的數(shù)量大大增加。比上述標(biāo)準(zhǔn)的ELISA法樣品制備過程縮短了一半的時間。ELISA方法本身，則僅需要大約2h而已(其中30min是操作時間，90min是孵育時間)。相比之下，黎兆滾等人的方法可在27h內(nèi)完成，比上述方法縮短了一半的時間，頗值得推廣應(yīng)用。最新式的沙門氏菌免疫學(xué)檢測法，利用經(jīng)特異性抗體敏化的免疫色譜卡片為基礎(chǔ)。幾滴樣品加到卡片上，結(jié)果可以直接用肉眼讀出。免疫色譜卡片極易操作，且由于無需要特殊設(shè)
4、備，很適合小型實(shí)驗(yàn)室使用。盡管卡片檢測法與ELISA法一樣需要對樣品進(jìn)行增菌處理，但它(卡片法)本身通常需時不超過10min，如果采用黎兆滾等人的樣品制備法，則可使操作時間更為縮短。3以核酸為基礎(chǔ)的方法細(xì)胞核酸DNA和RNA是唯一一類可以攜帶信息的大分子。由于所有的細(xì)胞都含有這種分子，可以利用它作為檢測的標(biāo)靶。標(biāo)靶通常是一個特異性核酸序列，它可通過以補(bǔ)體核酸分子作為探針來檢出。與免疫學(xué)方法相似，探針也需要加附適當(dāng)?shù)臉?biāo)記，如放射性同位素、酶或發(fā)光的標(biāo)識物。Fitts等人在食品沙門氏菌檢測中引入了第一代DAN—RNA雜交技術(shù)，此法應(yīng)用的探針含有用放射性同
5、位素標(biāo)記的傷寒沙門氏菌DNA片段，其敏感性高，經(jīng)大約48h的增菌步驟后，檢測極限可達(dá)108個細(xì)菌/ml，但由于要使用放射性同位素，只能在專門的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用，此方法的優(yōu)點(diǎn)都被抵消了。為此，以核酸雜交為基礎(chǔ)的第二代技術(shù)—比色計(jì)目前已發(fā)展起來。這種方法依賴于沙門氏菌核糖體RNA(rRNA)—核糖體發(fā)育過程中儲存的核酸成分的檢測。核糖體是細(xì)胞蛋白質(zhì)合成器的一部分，每個細(xì)菌細(xì)胞中存在5000～20000個復(fù)制體，而相比之下染色體DNA復(fù)制體僅2～10個。這種天然富含rRNA標(biāo)靶序列的情況使得用無輻射計(jì)檢測成為可能，同時又保持了與放射性同位素方法相當(dāng)或更高的敏感性
6、。其另一優(yōu)點(diǎn)是由于rRNA為單鏈(而DNA為雙鏈)，雜交前無需經(jīng)過變性步驟。要得到陽性結(jié)果，此法需要105個靶細(xì)胞/ml，因此對沙門氏菌檢測來說，需要進(jìn)行預(yù)增菌和選擇性增菌，總共約50h。rRNA探針法比沙門氏菌ELISA法更耗時，但二者成本相近。食品細(xì)菌檢測法的最新進(jìn)展是在化學(xué)擴(kuò)增體系方面的發(fā)展，即聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)，用該體系可對制備好的樣品進(jìn)行細(xì)菌DNA擴(kuò)增，以便更易于用諸如凝膠電泳法或比色型ELISA法檢測。用于檢測沙門氏菌和其它以食物為載體的病原的PCR方法業(yè)已建立，其中一些方法顯示了極好的敏感性。但該法較難自動化，且必需經(jīng)選擇性增菌以稀
7、釋可能干擾檢測反應(yīng)的某些成分。一個完整的以PCR為基礎(chǔ)的方法，需要2天才能完成，很大程度上抵銷了其高敏感性的優(yōu)點(diǎn)，但這種方法對那些含沙門氏菌較少或沙門氏菌“致傷”嚴(yán)重難以復(fù)蘇而仍保有沙門氏菌rRNA的樣品尤其有效。盡管目前用來檢測沙門氏菌的方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，但隨著科學(xué)發(fā)展，技術(shù)進(jìn)步，人們探索、實(shí)踐的繼續(xù)深入，我們可以期待，將會有更多，敏感性更高，特異性更強(qiáng)，診斷時間更短的新方法出現(xiàn)。4兩種沙門氏菌快速檢測法4.1Transia沙門氏菌平板檢測法與耗時、昂貴的傳統(tǒng)方法相比，此法快1～2天，且每次檢測所需的操作時間縮短。該法建立在夾心ELISA法的基礎(chǔ)上，
8、利用多抗體混合物以保證檢出所有的沙門氏菌血清型。反應(yīng)的固相載體是一種有可見或不可見條紋的微量反應(yīng)板。其小孔內(nèi)
