兩歧雙歧桿菌培養(yǎng)基成分的改進(jìn)

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1、1/居述林乎雪奇馬向前周德慶（微生物學(xué)和徽生物工程系》提要報(bào)據(jù)収歧桿菌的特殊生長要求及培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)原則，在比較30余種現(xiàn)有取歧桿菌與乳酸菌培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)了BIB培養(yǎng)基，并通過選擇EIB中最適蛋白廉品種及增加適量泡菜汁?改進(jìn)BIB為BIB-1.結(jié)果表明：每毫升BIB?1培養(yǎng)基培養(yǎng)兩歧取歧桿菌ATCC29521所礙的最高活菌數(shù)約為其他培養(yǎng)基的10?30倍.此外，還證明了研究中選用的=膜聶白膿?'所含的游離天冬猷胺、谷氨酸?鳥氨酸和瓜氨酸是促進(jìn)兩歧雙歧桿菌ATCC29521生長的重要因子.關(guān)■詞培養(yǎng)

2、邏」理歧雙歧桿菌,單白凍;御菜比中圖法分類號(hào)Q93-335「訂"土千母自1899年Tisser從健康母乳喂養(yǎng)的嬰兒糞便中分離到雙歧桿菌后，由于它具有很強(qiáng)的保健作用⑴?一直吸引著細(xì)菌學(xué)家、醫(yī)學(xué)家和營養(yǎng)學(xué)家們的興趣.經(jīng)過近百年的研究，雙歧桿菌早已彼制成藥品和不同類型的微生態(tài)調(diào)節(jié)劑.由于雙歧桿菌生長較慢、嚴(yán)格厭氧和不易保藏等原因?使得它的應(yīng)用受到一定的限制.長期以來?如何改善雙歧桿菌的培養(yǎng)條件一直是雙歧桿菌研究的一個(gè)重點(diǎn)?而培養(yǎng)基則是培養(yǎng)條件中一個(gè)很重要的方面?本文以典型的兩歧雙歧桿菌為對象?對其培養(yǎng)基成

3、分作了若干較有意義的改進(jìn).1材料和方法L1材料菌種：兩歧雙歧桿菌^Bifidobacterium如倒初?）ATCC29521:培養(yǎng)基：VL培養(yǎng)基⑵.LAB培養(yǎng)基C，SMRS培養(yǎng)基〔".BIB培養(yǎng)基：蛋白腺：普通蛋白K（Peptone,上海東海制藥廠），胰蛋白腺（Tryptone?上海東海制藥廠）?酪蛋白陳（CaseinPeptoneUSAICN?進(jìn)口分裝兒際蛋白腺（ProteosePeptone,上海東海制藥廠）?植豚（Phytone.上海新興醫(yī)藥保健品科技開發(fā)中心化工試劑部），多聚蛋白豚（Poly

4、peptone,浙江玉環(huán)紅星生化制品廠人厭氧培養(yǎng)裝置：825-A型厭氧罐（沈陽第五人民醫(yī)院生產(chǎn)）?亨蓋特試管及丁基橡膠塞；儀器：PHS-3DC精密數(shù)顯酸度計(jì)丄KB4151氨基酸自動(dòng)分折儀.收稿日期：1997—03—05第一作者居述林?男?1973年生?碩士研究生、聯(lián)系作者周德慶，教授z復(fù)旦大學(xué)微生物和微生物工程系?上海200433*上海市高尋學(xué)?？茖W(xué)技術(shù)發(fā)展基金資助課題12方法雙歧桿菌培養(yǎng)方法（1）菌種活化：取少量菌種接入裝有9mlBIB培養(yǎng)基的亨蓋特試管中，然后抽氣、充氮?重復(fù)3次后?置37'C厭

5、氧培養(yǎng)24h.（2）在亨蓋特試管中加入9ml所測培養(yǎng)基■接1ml活化菌液，置37'C厭氧培養(yǎng)?方法同上?雙歧桿菌計(jì)數(shù)方法：用改進(jìn)的馬-周試管計(jì)數(shù)法訊，根據(jù)試樣中含菌量的大小?前幾支試管以0.9%生理鹽水代替半固體培養(yǎng)基.泡菜汁的制作：用清水洗凈新鮮胡蘿卜表面?再用溫開水洗3遍■切成片：把它與溫開水配制的2%NaCl溶液1:1放入干凈的泡菜壇中?液面距壇口約2?3cm左右?加蓋，用水封口；37"C培養(yǎng)36h后，取泡菜汁.2結(jié)果2?1B1B培養(yǎng)基與LAB.VL和MRS培養(yǎng)基的比較報(bào)據(jù)雙歧桿菌特殊生長要求

6、皈及培養(yǎng)基設(shè)計(jì)原則〔門，我們在比較30余種文獻(xiàn)中常用的雙歧桿菌和乳酸菌培養(yǎng)基⑵的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)了以T.BIB培養(yǎng)基，其成分為：葡萄糖10g,乳糖10g，胰蛋白豚10g?酵母膏6g?牛肉膏6g-MgSO.?7HQ0?5g?吐溫-801ml?泡菜汁15mhNa2HPO4?2HQ10g,KH2PO46g?加蒸18水至1000ml,pH7.0.以BIB為基礎(chǔ)，與常用的LAB,VL和MRS作比較，結(jié)果見圖1,圖2?由圖可看出?用BIB培養(yǎng)基培養(yǎng)兩歧雙歧桿菌ATCC29521在達(dá)到穩(wěn)定期時(shí)，其活菌數(shù)（1?31X1

7、08）高于其他3種培養(yǎng)基.pH值F降也較慢?所以BIB培養(yǎng)基更適合于該菌株的生長.訂8~匕~~衣走_(dá)?8"h3081524324048r/h圖1A1CC29521菌株在B1B.LAB,圖2ATCC29521菌蛛在B1B,LAB.MRS和VL培養(yǎng)基中的生長曲線MRS和VL培養(yǎng)基中pH值的變化2.2不同量白豚對ATCC29521菌株生長的影響在BIB培養(yǎng)基中，分別用6種不同的蛋白豚：普通蛋白BUPE）.#?蛋白M（TR）,酪蛋白牒（CP）?月示蛋白腺（PP）.植脈（PH）,多聚蛋白豚（PO）,培養(yǎng)ATC

8、C29521菌抹28?30h,計(jì)數(shù)結(jié)果見表1.從表1看岀，其中以胰蛋白豚作用最好，故在以下實(shí)驗(yàn)中?BIB中的蛋白陳均采用胰蛋白晾?1不同M白對ATCC29521菌株生長的形哨10?cfu/ml蛋白藤PETRCPPPPHPO活菌數(shù)2.5331012156.0■2.34種待有ftXtt對ATCC29521菌株生長的影我們選擇魏蛋白豚與普通蛋白腺，分別進(jìn)行氨基酸自動(dòng)分析，發(fā)現(xiàn)胺蛋白淼中含普通蛋白礫所沒有的游離天冬酰胺、鳥氨酸和瓜氮酸?谷氨酸含量也遠(yuǎn)高于普通蛋白腺?結(jié)果見表2