1細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)概論

《1細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)概論》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、臨床細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)概述IntroductiononClinicandDiagnosticBacteriology江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)學(xué)系病原生物學(xué)教研室周天戟教授8/28/20211本章內(nèi)容第一節(jié)標(biāo)本的采集和處理原則第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定第四節(jié)細(xì)菌的非培養(yǎng)檢測方法8/28/20212第一節(jié)標(biāo)本的采集和處理原則一、標(biāo)本采集的一般原則1．早期采集2．無菌操作3．根據(jù)目的菌的特性用不同的方法采集4．采集量適當(dāng)5．注意生物安全8/28/20213第一節(jié)標(biāo)本的采集和處理原則二、標(biāo)本的處理1.對環(huán)境敏感的細(xì)菌如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌

2、和流感嗜血桿菌等應(yīng)保溫并立即送檢2.其他各種標(biāo)本采集后最好在2h之內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室3.若不能及時(shí)送檢，標(biāo)本應(yīng)置于一定環(huán)境中保存4.一般情況下，用于細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本保存時(shí)間不應(yīng)超過24h8/28/20214５.病人標(biāo)本中可能含有大量致病菌，必須注意安全防護(hù)６.標(biāo)本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必須包裝好，防止送檢過程中倒翻或碰破流出７.對于烈性傳染病標(biāo)本運(yùn)送時(shí)更要特別嚴(yán)格，必須按規(guī)定包裝，由專人運(yùn)送８.厭氧性標(biāo)本應(yīng)放在專門的運(yùn)送瓶或試管內(nèi)運(yùn)送，有時(shí)可直接用抽取標(biāo)本的注射器運(yùn)送8/28/20215藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)本直接涂片鏡檢分離培養(yǎng)形態(tài)學(xué)試驗(yàn)生化試驗(yàn)免

3、疫學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)明確診斷初步診斷免疫學(xué)試驗(yàn)分子生物學(xué)技術(shù)其他檢測技術(shù)細(xì)菌感染的檢驗(yàn)程序輔助診斷8/28/20216第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查1.鏡檢可以了解有無細(xì)菌及大致的菌量2.通過形態(tài)學(xué)檢查可得到初步診斷，對臨床早期診斷和治療疾病有一定的參考意義3.根據(jù)細(xì)菌形態(tài)、結(jié)構(gòu)和染色性有助于對病原菌的初步識別和分類，用于細(xì)菌鑒定細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查的意義8/28/20217不染色標(biāo)本的檢查：初步觀察、細(xì)菌動(dòng)力單染色法：細(xì)菌形態(tài)復(fù)染色法：細(xì)菌形態(tài)、結(jié)構(gòu)與鑒別革蘭染色法（Gramstain）抗酸染色法（acid-faststain）特殊染色法：負(fù)染色、鞭毛染色細(xì)

4、菌的形態(tài)學(xué)檢查法8/28/20218一、不染色標(biāo)本1.細(xì)菌不經(jīng)染色直接鏡檢，主要用于檢查生活狀態(tài)下細(xì)菌的動(dòng)力及運(yùn)動(dòng)狀況2.常用的方法有壓滴法和懸滴法有動(dòng)力：可看到細(xì)菌自一處移至另一處，有明顯的方向性位移無動(dòng)力：細(xì)菌呈現(xiàn)布朗運(yùn)動(dòng)，只在原地顫動(dòng)而無位置的改變3.有些病原菌通過不染色標(biāo)本的動(dòng)力檢查可作出初步鑒定如疑似霍亂患者，鏡下觀察到來回穿梭似流星狀運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌，制動(dòng)試驗(yàn)陽性，可初步推斷為“疑似O1群霍亂弧菌”。8/28/20219二、染色標(biāo)本（一）常用染料1．堿性染料：堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫、美藍(lán)等2．酸性染料：有伊紅、剛果紅等3．復(fù)合染料（中性染料）

5、及熒光染料：復(fù)合染料有瑞氏染料（伊紅美藍(lán)）、姬姆薩染料（伊紅天青）等；熒光染料有熒光標(biāo)記的抗體8/28/202110（二）常用的染色方法1．革蘭染色（gramstain）方法：1、結(jié)晶紫初染1min2、盧戈氏碘液媒染1min3、95％酒精脫色30sec～1min4、稀釋石炭酸復(fù)紅復(fù)染1min原理：G+等電點(diǎn)低，帶正電荷的堿性燃料作色牢固G+細(xì)胞壁肽聚糖層多，G-細(xì)胞壁脂質(zhì)含量高G+含有較多核糖核酸鎂鹽，與結(jié)晶紫、碘結(jié)合成大分子復(fù)合物意義：鑒定細(xì)菌與致病性有關(guān)選擇抗菌藥物參考革蘭陰性桿菌革蘭陽性球菌8/28/202111（二）常用的染色方法2．

6、抗酸染色（acid-faststain）方法：1、石炭酸復(fù)紅初染加熱3~5min，水洗2、3%~5%鹽酸酒精脫色30s，水洗3、堿性美藍(lán)復(fù)染30s，水洗。原理：分枝桿菌屬的細(xì)菌，胞壁脂質(zhì)多，其中的分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅結(jié)合成牢固的復(fù)合物，能抵抗脫色意義：可將細(xì)菌分為兩大類：-抗酸性細(xì)菌-非抗酸性細(xì)菌8/28/202112（二）常用的染色方法3．熒光染色（1）熒光染色法敏感性強(qiáng)，效率高而且容易觀察結(jié)果，在臨床細(xì)菌鑒定中有很大的實(shí)用價(jià)值。（2）主要用于結(jié)核分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌、白喉棒狀桿菌及痢疾志賀菌等的檢測。4.鞭毛染色：可觀察到菌體上有無鞭毛

7、、鞭毛的位置及數(shù)量，在細(xì)菌鑒定中，特別是非發(fā)酵菌的鑒定中很重要。5.異染顆粒染色：用于白喉棒狀桿菌染色。8/28/202113（二）常用的染色方法6.芽胞染色：7.墨汁染色:一般用于新型隱球菌檢查8/28/202114第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定選擇培養(yǎng)基接種選擇培養(yǎng)方法選擇可疑菌落選擇鑒定方法8/28/202115細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定一、培養(yǎng)基的種類和選擇培養(yǎng)基的組成成分、培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)基的選擇二、分離及培養(yǎng)細(xì)菌的分離、細(xì)菌培養(yǎng)方法三、生化反應(yīng)和鑒定碳水化合物的代謝試驗(yàn)蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝試驗(yàn)碳源和氮源利用試驗(yàn)8/28/202116一、培養(yǎng)

8、基的種類和選擇培養(yǎng)基（culturemedium）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)物制品。8/28/202117(一)培養(yǎng)基的組成成分1．營