米糠多糖的提取研究

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1、米糠多糖的提取研究米糠多糖(RiceBrainpolysaccharide,RBP)存在于稻谷的穎果皮層里，主要是指分子量不等的一類(lèi)非淀粉多糖。采用不同的提取工藝會(huì)得到不同的米糠多糖組分。米糠多糖具有廣泛的生理活性，在抗腫瘤，增強(qiáng)免疫力，降血糖，降脂方面有顯著效果。多糖捉取的方法冇微波浸提法，熱水蒸煮法，超聲浸提法等。實(shí)驗(yàn)中比較了不同去除雜質(zhì)方法對(duì)所得米糠多糖含最的比較，同時(shí)也對(duì)3種多糖提取方法在米糠多糖的提取屮所得的多糖含量進(jìn)行了比較。選取較優(yōu)的微波提取法，并對(duì)其提取工藝參數(shù)進(jìn)行了進(jìn)一步優(yōu)化。1.米糠多糖的提取實(shí)驗(yàn)材料米糠：無(wú)錫秦良商貿(mào)有限公司耐髙溫a-淀粉酶：無(wú)錫

2、酶制劑廠，20000IU/g試劑：無(wú)水乙醇、石油瞇、三氯乙酸、鹽酸均為分析純，購(gòu)口國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。1.2儀器722型可見(jiàn)光分光光度計(jì)；LD4-2A型臺(tái)式離心機(jī)；Panasonic微波爐；真空冷凍干燥機(jī)。1.3實(shí)驗(yàn)方法1.3.1米糠樣品的前處理將米糠用石油醯按1：3比例脫脂1小時(shí)，重復(fù)3次，自然十燥。1?3?2用改進(jìn)的硫酸.苯酚法測(cè)米糠多糖含量1.3.2.1顯色劑的制備將50譏濃硫酸緩緩加入10mL水中，冷卻至室溫，加入0.6g苯酚品體攪拌使其溶解配成顯色液。1.322硫酸?苯酚法測(cè)米糠多糖含量取LOOmL稀釋一定倍數(shù)的糖液于試管中加入5.00mL顯色液振蕩混

3、勻；取1.00mL蒸徭水于試管屮加入5.00mL顯色液振蕩混勻，得到參比溶液。將標(biāo)準(zhǔn)溶液和參比溶液置于沸水浴屮保溫3()?35min,取出示放在冷水浴屮冷卻至室溫，于49()nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光值。傳統(tǒng)的硫酸■苯酚測(cè)糖法的操作過(guò)程是：取1.00mL樣品加l.OOmL水，加1.00mL6%苯酚搖勻后再加入5mL濃硫酸，振蕩顯色，靜置30min后，于490nm處檢測(cè)其吸光隊(duì)加入硫酸吋系統(tǒng)顯色溫度相差較大，而造成相應(yīng)的偶然偏差。而改進(jìn)后的方法，由丁?先把水和硫酸混合，對(duì)■濃硫酸起到了稀釋作用，用冰水冷卻最后加入苯酚品體，配成顯色液。通過(guò)沸水浴加熱來(lái)使其顯色，保證了反應(yīng)系統(tǒng)溫

4、度一致，很好地解決了檢測(cè)重現(xiàn)性與準(zhǔn)確度的問(wèn)題。1?3?3去除雜質(zhì)方法的比較在多糊提取的過(guò)程屮，蛋白與淀粉的去除會(huì)影響到多糖的純度與得率。因此本實(shí)驗(yàn)采用50%微波火力浸提30min,重復(fù)兩次提取?？疾炝薙evage法與三氯乙酸法去蛋口法；同時(shí)也考察了淀粉一步消化法與兩步消化法。正交實(shí)驗(yàn)見(jiàn)表1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖loSevage法二氯乙酸法一步消化法兩步消化法30%醇沉I7VVIIVVVIIIVVIVVVV圖1正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果由此町以看出：淀粉一步消化所得多糖略高于兩步消化所得，可能是由于在較短的時(shí)間內(nèi)淀粉未去盡，而淀粉本身就是-?種多糖物質(zhì)，為了得到較純的米糠多糖，實(shí)驗(yàn)優(yōu)先考慮采

5、用兩步消化法；在去蛋白的方法屮，比較II、IV得知，采用Sevage法與三氯乙酸法所得米糠多糖含量差別不大，考慮到Sevage法毒性較大，耗時(shí)較長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)優(yōu)先考慮三氯乙酸法。1.3.4米糠多糖提取方法選擇1.3.4.1微波浸提法脫脂米糠與pH=5的鹽酸水溶液以料液比為1：10混合置于50%微波火力下浸提30min,冷卻，離心得上層液，重復(fù)提取兩次，合并上層液。在上層液屮加入0.5%的耐高溫—淀粉酶于70°C的水浴鍋中保溫消化2小時(shí)后，再加入().25%的().5%的耐高溫a■淀粉他，在相同的條件下保溫消化15小時(shí)，離心得上清液。用30%的三氯乙酸調(diào)節(jié)上述得到的上清液的p

6、H值=4.5(即米糠蛋白等電點(diǎn)，pl),置于4七冰箱中靜置過(guò)夜，使得米糠蛋白得以充分沉淀。離心得上清液。在上述得到的上清液中，加入無(wú)水乙醇，使其含量為30%(V/V),置于4°C冰箱中靜置過(guò)夜，離心，得到米糠粗多糖RBPa溶液。用722型分光光度計(jì)測(cè)其吸光值，計(jì)算米糠多糖含量。1.3.4.2熱水蒸煮浸提法脫脂米糠與pH=5的鹽酸水溶液以料液比為1：10混合置于110°C水浴鍋屮，使其保持沸騰狀態(tài)2小時(shí)，期間不斷攪拌，定時(shí)補(bǔ)入損失的水分，冷卻，離心得上層液，重復(fù)提取兩次，合并上層液。下續(xù)步驟同1.322。1.3.4.3超聲波浸提法脫脂米糠與pH=5的鹽酸水溶液以料液比為

7、1：10混合，在80°C條件下超聲提取30min,冷卻，離心得上層液，重復(fù)提取兩次，合并上層液。下續(xù)步驟同1.322。1.3.5比較結(jié)果上述方法均是參考了有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，采用的捉取率相對(duì)較高的實(shí)驗(yàn)條件。通過(guò)722型分光光計(jì)對(duì)兩種糖含量的測(cè)定，見(jiàn)圖2OnJ見(jiàn)，微波法不僅在提取時(shí)間陽(yáng)口在糖的浸出率方面更具冇優(yōu)勢(shì)。因此實(shí)驗(yàn)采用微波浸提法，并對(duì)提取時(shí)間，提取火力進(jìn)行了研究。圖23種提取方法所得米糠多糖含量1.3.5微波浸提工藝1.3.5.1微波提取脫脂米糠與pH=5的鹽酸水溶液以料液比為1：8混合，分別在50%微波火力條件下浸提30min(I),50min(I