腫瘤多藥耐藥的基因治療

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1、腫瘤多藥耐藥的基因治療劉忠民王克勇陳勇腫瘤細胞對化療約物的耐受性是腫瘤治療的主要障礙。臨床上許多腫瘤在經(jīng)歷了最初有效的化療之后，最終仍難免于復(fù)發(fā)，其上要原因是腫瘤細胞対化療產(chǎn)牛咐受性。因此，逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞的耐藥性，是提窩腫瘤化療療效的關(guān)鍵。研究表明，腫瘤細胞mdrl基因編碼的p■糖蛋白(p?glycop「otein,P?gp)的過度表達是導(dǎo)致腫瘤細胞多藥耐藥(multidrugresistance,MDR)的重要原因［門。冃前許多藥物可以用來逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞的MDR,但不能從根本上解決問題，效果欠佳,而且具彳j一定的毒副作用［2］。與傳統(tǒng)的藥物治療相比，基因治療具有作用特異，敏感，毒副作用低等諸多

2、優(yōu)點，在MDR逆轉(zhuǎn)中有廣闊的發(fā)展前景。1MDRI基因的反義寡聚脫氧核糖核酸(AOD)李惠芳等利用"補于MDRI基因5’末端轉(zhuǎn)錄起始部位的AOD轉(zhuǎn)染表達MDRI基I大I的KB■&5細胞株后，細胞內(nèi)P-gp表達水平下降，細胞內(nèi)柔紅霧索濃度提高，被轉(zhuǎn)染細胞對藥物的LC50由原來藥物敏感株的5.6倍降為3.2倍。以上結(jié)果說明AOD逆轉(zhuǎn)了P-gp介導(dǎo)的約物耐受性，但逆轉(zhuǎn)作用不完全。作者分析其原因之一為AOD的降解問題。為此，作者以脂質(zhì)體Lipofectin作為轉(zhuǎn)基因載體，使AOD的耐藥逆轉(zhuǎn)作用冇所提窩，提示脂質(zhì)體對作為引導(dǎo)AOD靶向治療的方式之一［3］。針對AOD的降解問題，Cucco等利用硫代磷酸修

3、飾的MDRI基因的AOD進行MDR逆轉(zhuǎn),發(fā)現(xiàn)在體內(nèi)外均明顯提高口血病細胞耐約細胞系對長春新堿(VCR)的敏感性［4］。因修飾后町増加AOD對核酸酶清除作用的耐受性，且易溶于水，能更有效地與靶基因進行雜交，從而增加了其逆轉(zhuǎn)作用［5］。另冇作者則認(rèn)為對核酸上的氧原了進行硫代化、甲妹化或用脂質(zhì)體進行包裹等方法在提髙細胞攝入AOD的同時，一方而增加了細胞痔性，同時也降低了核酸反義抑制的效應(yīng)。將低分了量的聚乙二醇(PEG)連接在AOD的5的末端，結(jié)果顯示細胞內(nèi)AOD攝入率明顯增加，窩于其它修飾方法，且不影響細胞的生長特性。說明AOD的5'末端連接PEG在反義治療領(lǐng)域具有廣闊應(yīng)用前景［6］。2MDRI基

4、因的反義RNAAOD的作用是封閉MDRI基因而影響基I大I的轉(zhuǎn)錄，反義RNA則是打MDRI基I大I的mRNA形成二聚休而抑制mRNA的翻譯。曹江等［7］利用高表達反義MDRI?RNAJR組質(zhì)粒pRMAS轉(zhuǎn)染耐藥細胞K562/DOX后，英P■糖蛋口近乎陰性，細胞內(nèi)柔紅霉素濃度與敏感細胞系K562幾乎-致，說明P■糖蛋白介導(dǎo)的藥物外排幾乎完全被抑制，顯示將反義RNA的模板DNA導(dǎo)入細胞內(nèi)，町產(chǎn)生大量反義RNA抑制MDRI基

5、大I農(nóng)達。資料還顯不?細胞除對阿壽素的耐受性完全被逆轉(zhuǎn)外，對長春新堿和柔紅霉素的耐受性仍保留9.0倍和14.1倍以上，說明P■糖蛋門表達轉(zhuǎn)陰后，MDR并不能完全逆轉(zhuǎn)，提示還有

6、其它機制作用于細胞的MDR。3切割MDRImRNA的核酶核fW(Ribozyme)是正常存在于細胞內(nèi)并調(diào)控基因表達的RNA,具有核背酸內(nèi)切酶活性，能序列地切割靶RNA,抑制慕I大］的表達。土寶成籌設(shè)計合成的能切割MDRI?mRNA第196密碼了GUC序列的錘頭狀核酚疋向克隆于逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pDOR-neo的BamHI位點。經(jīng)病毒包裝細胞BA317包裝后感染人肝癌MDR細胞株BEL-7402/DOX細胞，RT-PCR證實轉(zhuǎn)化細胞屮MDRI-mRNA與未轉(zhuǎn)化細胞相比明顯減少其至不能擴增出來。P-gp的農(nóng)達，與非轉(zhuǎn)化細胞的93.4%?97.5%相比卜?降至8.2%?14.6%。并對多種化療藥物重新

7、產(chǎn)牛較高的敏感性。以上結(jié)果農(nóng)明農(nóng)達核酶的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)化BEL-7402/DOX細胞后能冇效地抑制MDRI壟因的表達,使己產(chǎn)個耐藥的腫瘤細胞的MDR表型發(fā)仆?逆轉(zhuǎn)［8］。說明應(yīng)用核酶是逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞MDR仃效、特異性的方法。4針対MDRI基因調(diào)節(jié)基因的基因治療4.1細胞因子基因Stein等［9］的研究發(fā)現(xiàn)機體免疫系統(tǒng)的一些細胞因子如TNF,IFN和IL-2可降低MDRI基因mRNA和P-gp的表達水平，增加細胞對MDR相關(guān)藥物阿霉索(ADM)及VCR的敏感性。但細胞因子靜脈應(yīng)用可產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用,將細胞因子基因?qū)肽[瘤細胞,在腫瘤局部微環(huán)境中產(chǎn)牛和釋放細胞因子，可減輕全身應(yīng)用的副作用。為此，

8、他們又將TNF和IL?2基因轉(zhuǎn)入人結(jié)腸癌耐藥細胞系HCT15和HCT笛6細胞屮。結(jié)果顯示TNF和IL-2基因在人HCT15和HCT餡6細胞中的表達可降低MDRI?mRNA和P-gp的表達水平，使細胞內(nèi)ADM積累增加，細胞對ADM及VCR敏感性升高。說明TNF和IL?2基因的傳染和表達可逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞的MDR,聯(lián)介應(yīng)用基因治療和化療對耐腫瘤的治療具有潛在的價值［10］。4.2抑癌基因和癌基因研究顯示腫瘤紐?織屮p