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《直接抗人球蛋白IgG檢查標(biāo)準(zhǔn)操作程序》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、直接抗人球蛋白IgG檢查標(biāo)準(zhǔn)操作程序1.試驗原理和目的將抗球蛋白血清加入已經(jīng)致敏的紅細(xì)胞鹽水懸液中,紅細(xì)胞表面的抗體球蛋白與抗球蛋白血清中的抗體發(fā)生特異性反應(yīng),通過橋梁作用使紅細(xì)胞發(fā)生凝聚。通過直接抗人球蛋白試驗可檢查紅細(xì)胞是否被不完全抗體所致敏,如新生兒溶血?。ㄌ杭t細(xì)胞被母親血型抗體致敏)、溶血性輸血反應(yīng)(輸入的不相合紅細(xì)胞被受者不完全抗體致敏)、自身免疫性溶血性貧血(患者紅細(xì)胞被自身抗體致敏)以及藥物誘導(dǎo)產(chǎn)生的自身抗體(由甲基多巴類藥物、青霉素等所致)。2.標(biāo)本要求2.1病人準(zhǔn)備標(biāo)本采集前患者處于安靜狀態(tài),避免劇烈運
2、動、情緒激動。2.2標(biāo)本要求2.2.1標(biāo)本種類EDTA抗凝管2.2.2標(biāo)本容器01開頭的紫色短管(EDTA1:9抗凝)2.2.3標(biāo)本存放采完標(biāo)本立即送檢,標(biāo)本禁忌放入4°C?8°C冰箱中。已檢標(biāo)本封蓋后室溫放置,保存48小時后由醫(yī)院按感染標(biāo)本統(tǒng)一處理。2.2.3標(biāo)本拒收樣品標(biāo)識不清或標(biāo)識錯誤、采血管不正確、嚴(yán)重溶血或脂血、與申請單內(nèi)容不符等標(biāo)本。3.試劑3.1試劑成分:直接抗人球蛋白試劑盒(上海血液生物醫(yī)藥有限公司人抗TgG,C3d(多特異性)、抗IgG、抗C3d;理鹽水。3.2用不完全抗D致敏的5%Rh(D)陽性紅細(xì)胞鹽
3、水懸液供陽性對照用:収3人0型紅細(xì)胞,混合,經(jīng)鹽水洗滌后取壓積紅細(xì)胞,加等量抗D血清,置于37°C水浴致敏lh,鹽水洗滌3次,用鹽水配成5%紅細(xì)胞懸液。3.3正常人5%D陽性紅細(xì)胞懸液(未致敏),供陰性對照用,除不用抗D血清致敏外,按上述方法配制。3.4試劑貯藏要求:2?8°C冰箱.4.儀器4.1口本OLYMPUSCX31普通光學(xué)顯微鏡。4.2SSW型微電腦電熱恒溫水槽(上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)5.操作步驟5.1取受檢者紅細(xì)胞,以生理鹽水洗滌3次(3000rpmlmin),末次洗滌后,將上層鹽水倒盡,再以濾紙將管口
4、附著的鹽水吸去,配成5%紅細(xì)胞鹽水懸液。5.2取上述5%受檢者紅細(xì)胞鹽水懸液1滴,滴入1小試管內(nèi),加抗球蛋白血清2滴,混勻。5.3陽性對照:不完全抗D致敏的5%Rh(D)陽性紅細(xì)胞鹽水懸液1滴,滴入1小試管內(nèi),加抗球蛋白血清2滴,混勻。5.4陰性對照:常人5%D陽性紅細(xì)胞懸液(未致敏)1滴,滴入1小試管內(nèi),加抗球蛋白血清2滴,混勻。5.5受檢管及陽性、陰性對照管同時以3000r/min離心15秒,輕輕混和,觀察結(jié)果。4.檢驗結(jié)果報告6.1結(jié)果判定:須持一定角度輕輕地?fù)u動試管直到松動所有的細(xì)胞,然后反復(fù)傾斜試管,直到均勻的細(xì)
5、胞懸液(陰性)或者凝集物邙口性)為止。如陽性對照管凝集,陰性對照管不凝集,受檢紅細(xì)胞凝集者直接抗人球蛋白試驗為陽性,不凝集者為陰性。6.2報告?zhèn)鬏敿按蛴≡贚IS操作界而輸入結(jié)果,審核發(fā)送報告,門診和病房報告單在指定處打印。7.參考范圍正常人:陰性。8.安全防范操作時必須穿戴手套和工作服;工作后的臺面應(yīng)消毒擦洗;用過的加樣槍頭等耗材應(yīng)作為醫(yī)用垃圾處理;為了避免形成氣溶膠,所有樣品盡可能不要在空氣當(dāng)屮暴露A長時間;遇到樣本灑出,被污染的區(qū)域應(yīng)立即用次氯酸鈉溶液清洗,擦拭用的物品應(yīng)丟棄在標(biāo)有生物污染的垃圾筒屮。9.注意事項9.1
6、標(biāo)本采集后應(yīng)立即進(jìn)行試驗,延遲試驗或屮途停止可使抗體從細(xì)胞上丟失。9.2抗球蛋白血清應(yīng)按說明書使用最適稀釋度,否則,可產(chǎn)生前帶或后帶反應(yīng)而誤為陰性結(jié)果。9.3最好對陰性結(jié)果進(jìn)行核實,即在該試管屮再加1滴IgG致敏紅細(xì)胞,如結(jié)果為陽性,則表示試管內(nèi)的抗球蛋白血清確末被消耗。9.4紅細(xì)胞上吸附抗體太少或Coombs陰性自身免疫性溶血性貧血,直接抗球蛋白試驗可呈假陰性反應(yīng)。9.5全凝集或冷凝集血液標(biāo)本中含有Wharton膠且洗滌不充分,血液標(biāo)本中有很多網(wǎng)織紅細(xì)胞且抗球蛋白血清屮含有抗運鐵蛋白時,都可使紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集。9.6試劑儲
7、存于2-8°C,保存至有效期。勿長時間存放在高溫條件下或反復(fù)凍融。10?臨床意義10.1溫抗體型導(dǎo)致的ATHA,DAT強陽性。10.2藥物誘發(fā)的1山,Q—甲基多巴、青霉素DAT陽性,奎寧型多為IgM陽性10.3冷凝集綜合癥:用抗人全血清的抗人球蛋白血清與在37°C洗滌過的患者紅細(xì)胞作試驗,DAT陽性。10.4PNH患者在溶血發(fā)作時,DAT強陽性,發(fā)作后期轉(zhuǎn)陰。10.5新生兒同種免疫溶血病:因RH抗體引起溶血的病例,全抗或單抗IgG的DAT強陽性,AB0則多為陰性或弱陽性。10.6結(jié)締組織病,淋巴細(xì)胞增殖疾患,癌腫,EVAN
8、綜合癥等,DATnf呈陽性。11?參考文獻(xiàn)11.1《全國臨床檢驗操作規(guī)程》(第4版)11.2抗人球蛋白試劑盒使用說明書。