間接抗人球蛋白試驗標準操作規(guī)程.doc

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1、間接抗人球蛋白試驗標準操作規(guī)程(微柱卡式法)一、目的為規(guī)范抗人球蛋白（Coombs試驗）的技術操作，保證試驗的結果的準確性，為臨床診斷及治療提供依據(jù)，特制定本規(guī)程。二、使用范圍適用于輸血科進行抗人球蛋白試驗的操作。三、職責輸血科技術人員負責抗人球蛋白試驗的操作。四、原理利用抗人球蛋白血清可與體內已被不完全抗體或補體致敏紅細胞產生凝集反應，可檢查紅細胞是否已被不完全抗體所致敏，如新生兒溶血病(胎兒紅細胞被母親血型抗體致敏)、溶血性輸血反應(輸入的不相合紅細胞被受血者不完全抗體致敏)、自身免疫性溶血性貧血(患者紅細胞被自身抗體致敏)以及藥物誘導產生的自身抗體（由甲基多巴類藥物、青霉素等所致）。五

2、、試劑及材料(一)試劑：抗人球蛋白檢測卡（西班牙DiagnosticGrifols,S.A公司生產）、IgG抗D、正常人AB血清(二)設備：戴安娜專用離心機（型號：DGSPIN）、戴安娜專用孵育器（型號：DGTHERM）、微量移液器、離心機、試管等六、標本要求：(一)抽取受血者抗凝（抗凝劑為EDTA.K2）靜脈血2-3ml,在3000r/min條件下離心5分鐘備用。(二)標本保存：血液樣本必須密封，2-8℃保存7天。七、操作步驟(一)標本及其他試劑處理：1、實驗前將未開的抗人球蛋白檢測卡放置于戴安娜專用離心機離心9分鐘左右，取出待用2、離心標本取血清備用（或準備已知抗體的血清）3、配制1%已

3、知抗原紅細胞懸液（或1%受檢紅細胞懸液）4、1%D陽性紅細胞：任選3個O型D陽性紅細胞混合，配成1%紅細胞懸液(二)在抗人球蛋白檢測卡上標明患者姓名、病房床號、陰性和陽性對照，撕掉卡上的封條(三)按下表將各種反應物加入相應反應孔中。間接抗人球蛋白試驗操作步驟反應物待測孔陽性對照孔陰性對照孔血清（已知或受檢）25ul－－1%紅細胞懸液（受檢或已知）50ul－－IgG抗D血清－25ul－1%D陽性O型紅細胞懸液－50ul50ulAB型血清－－25ul(四)將卡放入37℃孵育箱15分鐘，移出放入離心機9分鐘，取出觀察結果。八、結果判定：陽性對照孔凝集，陰性對照孔不凝集，待測孔凝集者為陽性，表示受檢

4、血清中有不完全抗體（或受檢紅細胞上有相應抗原），待測孔不凝集為陰性。如陽性或陰性對照出現(xiàn)不規(guī)則結果應分析原因。九、注意事項：如受檢血清中檢出有不完全抗體，可將受檢血清以鹽水作倍量稀釋后，按上法進行測定。