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《總糖和還原糖的測(cè)定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、實(shí)驗(yàn)一、總糖和還原糖的測(cè)定——3,5-二硝基水楊酸法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握還原糖和總糖測(cè)定的基本原理；2、學(xué)習(xí)用3,5-二硝基水楊酸法測(cè)定還原糖的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理還原糖是指含有自由醛基或者酮基的糖類，單糖都是還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖；利用糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來；對(duì)沒有還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有還原性的單糖進(jìn)行測(cè)定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量（還原糖以葡萄糖含量計(jì)）。還原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，3,5-二硝基水楊酸則被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水
2、楊酸。NaOH黃色棕紅色加熱在過量的NaOH堿性溶液中，3-氨基-5-硝基水楊酸呈橘紅色，在540nm處有最大吸收，在一定的濃度范圍內(nèi)，還原糖的量與光吸收值成線性關(guān)系。利用比色法，在540nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度值，查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。三、實(shí)驗(yàn)器材1、材料：山芋粉2、儀器：電子分析天平、水浴鍋、V-1100可見分光光度計(jì)、移液器3、其他：試管、容量瓶、三角燒瓶、量筒、吸管（移液管）、洗耳球、玻棒、洗瓶、漏斗、離心管、六凹反應(yīng)盤、pH試紙（1～14）四、實(shí)驗(yàn)試劑1、標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液（1.0mg/ml）2、DNS試
3、劑3、6mol/LHCl4、6mol/LNaOH5、I2-KI溶液五、操作1、樣品中還原糖的提取準(zhǔn)確稱取0.5g山芋粉置于100ml三角燒瓶中加3ml蒸餾水，調(diào)成糊狀再加30ml蒸餾水50℃水浴，30min(不時(shí)攪拌)轉(zhuǎn)移至50ml離心管中，4000rpm，5min上清液1沉淀加20ml蒸餾水，洗滌沉淀，4000rpm，5min上清液2沉淀(棄)置于容量瓶中，蒸餾水定容至100ml,混勻，取1ml即可進(jìn)行還原糖的測(cè)定。2、樣品中總糖的水解、提取準(zhǔn)確稱取0.2g山芋粉置于100ml三角燒瓶中加3ml蒸餾水，調(diào)成糊狀再加12ml蒸餾水，5ml
4、6mol/LHCl沸水浴，30min(不時(shí)攪拌)取1～2滴于六凹反應(yīng)盤中，加1滴I2-KI溶液，如果完全不顯藍(lán)色，即可進(jìn)行下面的操作。冷卻至室溫用6mol/LNaOH調(diào)pH7.0（pH試紙）蒸餾水定容至100ml,混勻?yàn)V紙過濾，取10ml濾液用蒸餾水定容至100ml，成稀釋1000倍的總糖水解液，混勻,取1ml總糖水解液，測(cè)定其還原糖的含量3、制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線及還原糖、總糖含量的測(cè)定。取8支潔凈的試管，分別用記號(hào)筆標(biāo)上0～7號(hào)，按照下表進(jìn)行操作。其中0～5管，用于標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作,以吸光度為縱坐標(biāo)，各標(biāo)準(zhǔn)液濃度（mg/ml）為橫坐標(biāo)作圖得
5、標(biāo)準(zhǔn)曲線（用Excel表制作）。管號(hào)試劑01234567標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液/ml00.20.40.60.81.01.01.0蒸餾水/ml1.00.80.60.40.2000DNS試劑/ml2.02.02.02.02.02.02.02.0沸水浴中準(zhǔn)確煮沸5min，取出，用自來水冷卻至室溫蒸餾水/ml9.09.09.09.09.09.09.09.0葡萄糖含量/mg00.20.40.60.81.0C1C2A540nmab六、計(jì)算C1V1ω(還原糖)=——×100%m1C2V2ω(總糖)=——×0.9×100%m2附：相關(guān)儀器使用1、移液管的使用2、
6、移液器的使用3、離心機(jī)的使用注意配平，對(duì)稱放4、V-1100可見分光光度計(jì)的使用比色皿V-1100可見分光光度計(jì)開機(jī)預(yù)熱30min測(cè)吸光度選擇波長(zhǎng)（540nm）MODE鍵切換到T，將黑體放入光路中合上蓋，0鍵校零MODE鍵切換到A，參比液放入到光路中合上蓋，100鍵調(diào)零將待測(cè)液依次放入到光路中，即可得出待測(cè)液的吸光度。比色皿的使用
