總糖和還原糖的測(cè)定.doc

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1、總糖和還原糖的測(cè)定（3,5—二硝基水楊酸法）實(shí)驗(yàn)報(bào)告前言糖在我們?nèi)粘Ｉ钪须S處可見(jiàn)，我們吃的米飯、水果、零食中或多或少都含有一些糖類。同時(shí)，糖也是我們維持機(jī)體運(yùn)動(dòng)所必不可少的物質(zhì)，沒(méi)有了它，就沒(méi)有了能量的來(lái)源。我們這次便走進(jìn)實(shí)驗(yàn)室探索糖類的奧秘。本次實(shí)驗(yàn)我們將用3,5—二硝基水楊酸法測(cè)定總糖和還原糖中的含糖量。本次實(shí)驗(yàn)中，我們除了要掌握還原糖和總糖的測(cè)定基本原理還要學(xué)習(xí)比色法測(cè)定還原糖的操作方法以及分光度法測(cè)定的原理和方法。首先，讓我們一起來(lái)了解一下它們的測(cè)定方法吧。還原糖的測(cè)定是糖定量測(cè)定的基本方法。還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類，單糖都是還原糖

2、，雙糖和多糖不一定是還原糖，其中乳糖和麥芽糖是還原糖，蔗糖和淀粉是非還原糖。利用糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來(lái)，對(duì)沒(méi)有還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有還原性的單糖進(jìn)行測(cè)定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量（還原糖以葡萄糖含量計(jì)）。還原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，3,5-二硝基水楊酸則被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關(guān)系，利用分光光度計(jì)，在540nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度值，查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。由于多糖水解為

3、單糖時(shí)，每斷裂一個(gè)糖苷鍵需加入一分子水，所以在計(jì)算多糖含量時(shí)應(yīng)乘以0.9。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握還原糖和總糖的測(cè)定的基本原理2、學(xué)習(xí)比色法測(cè)定還原糖的操作方法3、學(xué)習(xí)分光光度法測(cè)定的原理和方法二、實(shí)驗(yàn)原理　還原糖的測(cè)定是糖定量測(cè)定的基本方法。還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類，單糖都是還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖，其中乳糖和麥芽糖是還原糖，蔗糖和淀粉是非還原糖。利用糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來(lái)，對(duì)沒(méi)有還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有還原性的單糖進(jìn)行測(cè)定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量（還原糖以葡萄糖含量

4、計(jì)）。還原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，3,5-二硝基水楊酸則被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關(guān)系，利用分光光度計(jì)，在540nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度值，查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。由于多糖水解為單糖時(shí)，每斷裂一個(gè)糖苷鍵需加入一分子水，所以在計(jì)算多糖含量時(shí)應(yīng)乘以0.9。三、材料與器具的準(zhǔn)備。實(shí)驗(yàn)材料：面粉。實(shí)驗(yàn)試劑（1）、1mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液　　　準(zhǔn)確稱取80℃烘至恒重的分析純葡萄糖100mg，置于小燒杯中，加少量蒸餾水溶解后，轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，用

5、蒸餾水定容至100mL，混勻，4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。?）、3,5-二硝基水楊酸（DNS）試劑　　　將6.3gDNS和262mL2MNaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加5g結(jié)晶酚和5g亞硫酸鈉，攪拌溶解，冷卻后加蒸餾水定容至1000mL，貯于棕色瓶中備用。（3）、碘-碘化鉀溶液：稱取5g碘和10g碘化鉀，溶于100mL蒸餾水中。（4）、酚酞指示劑：稱取0.1g酚酞，溶于250mL70%乙醇中。（5）、6MHCl和6MNaOH各100mL。實(shí)驗(yàn)器材（1）具塞玻璃刻度試管：20mL×11（2）大離心管：50mL×2（3）燒杯：

6、100mL×1（4）三角瓶：100mL×1（5）容量瓶：100mL×3（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1（7）恒溫水浴鍋（8）沸水浴（9）分光光度計(jì)分光光度計(jì)的基本原理是溶液中的物質(zhì)在光的照射下，產(chǎn)生了對(duì)光吸收的效應(yīng)，物質(zhì)對(duì)光的吸收是具有選擇性的。各種不同的物質(zhì)都具有其各自的吸收光譜，因此當(dāng)某單色光通過(guò)溶液時(shí)，其能量就會(huì)被吸收而減弱，光能量減弱的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系，也即符合比色原理——Lambert-Beer'slaw:數(shù)學(xué)表達(dá)式:A=lg(1/T)=KCLA為吸光度T為透射率,是投射光強(qiáng)度比上入射光強(qiáng)度C為吸光物質(zhì)的濃

7、度L為吸收層厚度K為吸收系數(shù)物理意義是當(dāng)一束平行單色光垂直通過(guò)某一均勻非散射的西光物質(zhì)時(shí),其吸光度A與吸光物質(zhì)的濃度C及吸收層厚度L成正比.四、實(shí)驗(yàn)步驟。器材與材料準(zhǔn)備完畢之后，便開(kāi)始按照以下步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。首先，制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。取6支20mL具塞刻度試管編號(hào)，按下表分別加入濃度為1mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液、蒸餾水和3,5-二硝基水楊酸（DNS）試劑，配成不同葡萄糖含量的反應(yīng)液。管號(hào)試劑012345標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液ml00.20.40.60.81.0蒸餾水ml2.01.81.61.41.21.0DNS試劑ml1.51.51.51.51.51.5接

8、下來(lái)，提取還原糖。準(zhǔn)確稱取2.00g食用面粉，放入100mL燒杯中，先用少量蒸餾水調(diào)成糊狀，然