血液制品去除滅活病毒技術(shù)方法及驗(yàn)證指導(dǎo)原則(共享)

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1、血液制品去除/滅活病毒技術(shù)方法及驗(yàn)證指導(dǎo)原則口前已知經(jīng)血液制品傳染的病毒主要有HBV、HCV、HIV-1.HIV-2、HTLV和細(xì)小病毒B19。尚未發(fā)現(xiàn)經(jīng)血液制品傳染CJD。但有少數(shù)研究報(bào)告發(fā)現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)性傳染現(xiàn)象，因此要密切關(guān)注CJD,特別是vCJD的發(fā)展動(dòng)向。為了提高血液制品安全性，生產(chǎn)工藝要具有一定的去除/滅活部分病毒能力，生產(chǎn)過程中應(yīng)有特定的去除/滅活病毒方法。本技術(shù)指導(dǎo)原則是對血液制品（指以人血漿為原料制備的制品）生產(chǎn)過程以及特定的去除/滅活病毒方法驗(yàn)證的指導(dǎo)原則，包括指示病毒和病毒去除/滅活方法的選擇、驗(yàn)證

2、方案的設(shè)計(jì)、結(jié)果判定以及附錄所列技術(shù)驗(yàn)證巾報(bào)的程序。一、去除/滅活病毒方法的選擇由于不同類血液制品潛在的污染病毒的可能性不同，為此選擇病毒去除/滅活方法的側(cè)重點(diǎn)也應(yīng)有所不同：（一）凝血因子類制品生產(chǎn)過程中應(yīng)冇特定的能去除/滅活脂包膜和非脂包膜病毒的方法，可采用一種或多種方法聯(lián)合去除/滅活病毒。（二）免疫球蛋白類制品對于免疫球蛋口類制品（包括靜脈注射用人免疫球蛋口、人免疫球蛋口和特異性人免疫球蛋白）生產(chǎn)過程中應(yīng)有特定的滅活脂包膜病毒方法。但從進(jìn)一步提高這類制品安全性考慮，提倡生產(chǎn)過程中加入特定的針對菲脂包膜病毒的去除

3、/滅活方法。（三）白蛋白采用低溫乙醇生產(chǎn)工藝和特定的去除/滅活病毒方法，如巴斯德消毒法等。二、常用的去除/滅活病毒方法評價(jià)（-）巴斯德消毒法（巴氏消毒法）1.人血口蛋口制品幾十年臨床應(yīng)用結(jié)果表明，白蛋白的巴氏消毒法對H1V和肝炎病毒是安全的。其病毒滅活條件已很完善，可不要求進(jìn)行病毒滅活驗(yàn)證。但是必須對巴氏消毒法所用設(shè)施進(jìn)行驗(yàn)證，使巴氏消毒各參數(shù)符合要求（包括制品內(nèi)溫度分布的均一性和滅活時(shí)間）。2?其它血液制品（液體制劑）由于制品的組成、穩(wěn)定劑（如：氨基酸、糖、枸椽酸鹽等）及其濃度的不同，均會對滅活病毒效果有一定的影

4、響。因此在采用巴氏消毒滅活病毒方法吋必須進(jìn)行病毒滅活效果驗(yàn)證。（二）干熱法（凍干制品）80°C加熱72小時(shí),可以滅活HBV、HCV、HIV和HAV等病毒。但應(yīng)考慮制品的水分含量、制品組成（如：蛋白質(zhì)、糖、鹽和氨基酸）對病毒滅活效果的影響。應(yīng)確定允許的制品瓶間各參數(shù)的差異。病毒滅活用的干熱箱至少每半年驗(yàn)證一次。驗(yàn)證時(shí)干燥箱內(nèi)應(yīng)設(shè)多個(gè)測溫點(diǎn)（包扌舌制品內(nèi)、箱內(nèi)最高和最低溫度點(diǎn)）。（三）有機(jī)溶劑/去污劑（S/D）處理法有機(jī)溶劑,如:磷酸三丁脂（TNBP）和非離子化的去污劑,如:TritonX-100或吐溫-80結(jié)合可以滅

5、活脂包膜病毒，但對非脂包膜病毒無效。常用的滅活條件是0.3%TNBP和1%吐溫-80,在24°C處理至少6小時(shí)；0?3%TNBP和l%TritonX-100,在24°C處理至少4小時(shí)。S/D處理前應(yīng)先用1um濾器除去蛋口溶液中可能存在的顆粒（顆粒可能藏匿病毒從而影響病毒滅活效果）。加入S/D后應(yīng)確保是均一的混合物。在滅活病毒全過程中應(yīng)將溫度控制在規(guī)定的范圍內(nèi)。如果在加入S/D后過濾，則須檢測過濾后S/D的濃度是否發(fā)生變化，如冇變化應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。吐溫-80應(yīng)采用植物源性，并應(yīng)采用稱量法量取。（四）膜過濾法膜過濾技術(shù)

6、只有在濾膜的孔徑比病毒有效直徑小時(shí)才能有效除去病毒。該方法不能單獨(dú)使用，應(yīng)與其它方法聯(lián)合使用。驗(yàn)證研究時(shí)應(yīng)考慮蛋口溶液的濃度、濾速、壓力和過濾量等重要參數(shù)。在過濾前及過濾后應(yīng)測試濾膜的完整性。（五）低pH孵放法研究表明,免疫球蛋白生產(chǎn)工藝中的低pH（如pH4）處理（有吋加胃酶）能滅活幾種脂包膜病毒。滅活條件（如：pH值、孵放時(shí)間和溫度、胃酶含量、蛋白質(zhì)濃度、溶質(zhì)含量等因素）可能影響病毒滅活效杲，驗(yàn)證試驗(yàn)應(yīng)該研究這些參數(shù)允許變化的幅度。三、特定的去除/滅活病毒方法驗(yàn)證（-）指示病毒的選擇首先，應(yīng)該選擇經(jīng)血液傳播的相關(guān)

7、病毒（如：H1V）,不能用相關(guān)病毒的，要選擇與其理化性質(zhì)盡可能相似的指示病毒；第二，所選擇的病毒理化性質(zhì)應(yīng)有代表性（病毒大小、核酸類型以及有無包膜），其屮至少應(yīng)包括一種對物理和/或化學(xué)處理有明顯抗性的病毒。在進(jìn)行去除/滅活病毒驗(yàn)證時(shí)，應(yīng)根據(jù)制品的特性及所采用的病毒去除/滅活工藝，參照卜?表列舉的病毒選擇適宜的指示病毒。所選擇的指示病毒至少應(yīng)包括HTV-kHBV和HCV模擬病毒以及非脂包膜病毒。水皰性口炎病毒（VSV）耐受的pH范圍比較廣，驗(yàn)證低pH孵放法滅活病毒效果時(shí)可選用此指示病毒。經(jīng)血液傳播疾病的和關(guān)病毒及驗(yàn)證

8、可選用的指示病毒（舉例）病毒基因組脂包膜大?。╪m）指示病毒舉例IIIVRNA有80-100IIIVHBVDNA有45鴨乙型肝炎病毒、偽狂犬病毒HCVRNA有40-60牛腹瀉病毒、Sindbis病毒IIAVRNA無27IIAV、脊髓灰質(zhì)炎病毒、腦心肌炎（EMC）病毒B19DNA無20犬細(xì)小病毒、豬細(xì)小病毒（二）方案設(shè)計(jì)1?去除/滅活病毒驗(yàn)證研究應(yīng)符合GLP的