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《SOD POD CAT酶活測定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、0.067mol/LpH7.0磷酸緩沖液分子量0.067molPH7.0(1000ml磷酸緩沖液)所需量（ｇ）Ｎa2HPO4.2H2O178.05 7.1184gＮa2HPO4.12H2O358.2214.4004gKH2PO4136.093.6292gＮa2HPO4.2H2O7.1184g(或Ｎa2HPO4.12H2O14.4004g)+KH2PO43.6292g定容到1000ml容量瓶中一根系活性的測定1、實驗材料、試劑與儀器設備1.實驗試劑乙酸乙酯(分析純，次硫酸鈉(Na2S2O4，分析純)，粉末，1%TTC溶液，磷酸緩沖液(1/15mol/L，pH7.0)，1m
2、ol/L硫酸。2.儀器設備小燒杯3個，研缽1個，移液管：0.5mL1支、10mL1支、5mL3支，刻度試管6支，分光光度計，電子天平，溫箱，試管架，藥勺，石英砂適量，濾紙。2、實驗內容操作步驟2、定量測定(1)TTC標準曲線的制作取0.4％TTC溶液0.2ml放入大試管中，加9.8ml乙酸乙酯，再加少許Na2S2O4粉末搖勻，則立即產生紅色的TTF。此溶液濃度為每毫升含有TTF80μg。分別取此溶液0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml置10ml刻度試管中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含TTF20μg、40μg、80μg、120μg、160μg
3、的系列標準溶液，以乙酸乙酯作參照，在485nm波長下測定吸光度，繪制標準曲線。（2）稱取根尖樣品0.5g，放入小燒杯中，加入0.4%TTC溶液和磷酸緩沖液(pH7.0)各5ml，使根充分浸沒在溶液內，在37℃下暗保溫1—2h，此后立即加入1mol/L硫酸2ml，以停止反應。(與此同時做一空白實驗，先加硫酸，再加根樣品，37℃下暗保溫后不加硫酸，其溶液濃度、操作步驟同上)。（3）把根取出，用濾紙吸干水分，放入研缽中，加乙酸乙酯3—4mL，充分研磨，以提出TTF。把紅色提取液移入刻度試管，并用少量乙酸乙酯把殘渣洗滌2—3次，皆移入刻度試管，最后加乙酸乙酯使總量為10ml，用分光
4、光度計在波長485nm下比色，以空白試驗作參照測出吸光度，查標準曲線，即可求出TTC原量。2.計算結果CW×h×1000根系活力[mgTTF/（g.h）]=式中：C——四氮唑還原量，μg;W——根重，g;h——時間，h。二葉綠素含量測定：95%乙醇溶液，在665、649、470nm處有最大吸收峰Ca=13.95D665-6.88D649Cb=24.96D649-7.32D665Cx.c=(1000D470-2.05Ca-114Cb)/245三抗氧化酶活性的定：0.05mol/L磷酸緩沖溶液(PBS)（pH=7.8）溶液的配制：65.5506gNa2HPO4·12H2O+2.
5、65285gNaH2PO4·2H2O,定容到4L。（參考陳建勛，王曉峰主編的《植物生理學實驗指導》，P134）。取低溫保存的鮮樣，稱2g左右的葉片（或根）放在50ml的離心管，加入20ml濃度為0.05mol/L磷酸緩沖溶液（pH=7.8）（最好是較冷的磷酸緩沖溶液，防止研磨時溫度過高使酶失活），研磨（用磨碎機磨），8000r/min的冷凍離心機下離心20分鐘，上清液為粗酶液。2.1丙二醛（MDA）的測定：20％三氯乙酸（TCA）溶液的配制：稱200g三氯乙酸，用蒸餾水定容到1000ml。（參考陳建勛，王曉峰主編的《植物生理學實驗指導》,P124）；0.5%硫代巴比妥酸（T
6、BA）溶液的配制：稱5g硫代巴比妥酸（TBA）,用20％三氯乙酸（TCA）溶液溶解并定容到1000ml。（參考陳建勛，王曉峰主編的《植物生理學實驗指導》,P124）（先加少量的氫氧化鈉1mol/L溶解）；0.5ml酶液（對照用0.5ml的0.05mol/LpH=7.8的磷酸緩沖液代替酶液）（做三個重復）+3mlTBA――振蕩――沸水浴上反應30min――冷卻（至少30min）――比色（OD600、OD532、OD450）。（參考陳建勛，王曉峰主編的《植物生理學實驗指導》，P124）?2.2超氧化物歧化酶（SOD）的測定：NBT(400ml)混合反應液:392mlPBS(Ph
7、=7.8),+0.0206gNBT+0.776g甲硫酸銨+8ml核黃素溶液+0.4mlEDTA-Na溶液（100mlPBS緩沖溶液中含0.01204g核黃素）。（另配）100mlPBS溶液加EDTA-Na3.7224gEDTA-Na測試時：取3ml反應液+0.05ml(根)或0.02ml(葉)粗酶液，于光照培養(yǎng)箱中6-10分鐘，OD650下測定吸光度。2.3過氧化物酶（POD）的測定：0.05mol/L磷酸緩沖溶液(PBS)（pH=7.0）溶液的配制：10.9251gNa2HPO4·12H2O+3.042975gN
