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《地貧的篩查診斷和治療.ppt》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、地中海貧血的篩查、實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)和治療一、地中海貧血的篩查地貧篩查目的：診斷出所有攜帶地貧基因者，重型和中間型地貧易診斷，因此最主要的是查出不被重視的輕型地貧和靜止型地貧基因攜帶者。正常人群地貧篩查步驟：首先是血細(xì)胞分析除了靜止型α地貧基因攜帶者（α地貧2）外，MCV，MCH基本上都低于正常。國(guó)際地貧協(xié)會(huì)認(rèn)為最廣泛使用的地貧截?cái)嘀担篗CV<79flMCH<27pg其次是Hb電泳與HbA2檢測(cè)β地貧：電泳法HbA2>3.5%高效液相法色譜法HbA2>4%α地貧與其它血紅蛋白?。篐bH病可見(jiàn)H區(qū)帶，血紅蛋白病可見(jiàn)相應(yīng)異常區(qū)帶。β地貧基因型與HbA2絕大多數(shù)β地貧基因突變型的基因攜帶者
2、HbA2均增高，我國(guó)主要的幾種突變型（41-42，IVS-Ⅱ654，17，71-71）均為的β0，HbA2均增高。α地貧1：MCV<79fl，MCH<27pg，HbA2偏低。但α地貧2多無(wú)任何提示。新生兒臍血檢測(cè)HbBart’s可診斷α地貧，這是α地貧篩查最經(jīng)濟(jì)而又簡(jiǎn)便的方法，在最基礎(chǔ)的衛(wèi)生院都能做到。有疑問(wèn)可進(jìn)行基因分析，可檢測(cè)國(guó)內(nèi)常見(jiàn)的17種β地貧基因突變，常見(jiàn)的3種α地貧基因缺失和常見(jiàn)的4種α地貧基因突變。二、地中海貧血診斷實(shí)驗(yàn)技術(shù)1.紅細(xì)胞脆性試驗(yàn)（一管法）試劑：0.32%NaCL緩沖液（以1%NaCL緩沖液32ml于100ml容器中，加入重蒸餾水至刻度。 方法：取0.
3、32%NaCL緩沖液2.5ml于小試管中，吸取全血10ul加入試管中，用吸管吸取溶液來(lái)回洗滌3次，再顛倒混勻，5分鐘后觀察結(jié)果。2.微量血紅蛋白電泳設(shè)備：電泳儀，電泳槽試劑：浸醋纖膜用Tris緩沖液，電泳槽用硼酸緩沖液，麗春紅染液溶血液制備：常用四氯化碳溶血法：去血漿→生理鹽水洗雜質(zhì)→蒸餾水溶血→四氯化碳溶解提取脂溶性物質(zhì)→離心得Hb液。電泳：取膜條，加溶血液于陰極端，然后電泳20-30分鐘。染色：取出膜條，麗春紅染液，染數(shù)分鐘，然后用3%醋酸溶液洗干凈，可觀察結(jié)果。3.血紅蛋白A2測(cè)定不連續(xù)電泳將HbA2分離后，分別剪出膜條中的HbA和HbA2區(qū)帶，分別放入試管中，HbA加蒸
4、餾水20ml，HbA2加4ml，浸泡30分鐘，不定時(shí)搖動(dòng)，使Hb完全冼脫下來(lái)后混勻，用721分光光度計(jì)以波長(zhǎng)413nm蒸餾水校正零點(diǎn)，讀取光密度OD值并計(jì)算出結(jié)果。4.抗堿血紅蛋白測(cè)定設(shè)備：721分光光度計(jì)，刻度吸管，秒表，玻璃漏斗，濾紙。 試劑：1/12mol/LKOH或NaOH溶液，酸性半飽和硫酸銨溶液。 方法：取兩支試管，測(cè)定管加入溶血液0.1ml，對(duì)照管加入0.02ml，于測(cè)定管中加入KOH1.6ml，搖勻，1分鐘時(shí)立即加入酸性半飽和硫酸銨溶液3.4ml，倒轉(zhuǎn)6次，放10分鐘，濾取溶液檢測(cè)，用波長(zhǎng)540nm蒸餾水校正零點(diǎn)，分別讀取測(cè)定管和對(duì)照管光密度OD值，計(jì)算出結(jié)果。
5、5.全自動(dòng)電泳儀用于Hb電泳及HbA2和HbF測(cè)定目前國(guó)內(nèi)使用的主要有▲美國(guó)生產(chǎn)的Helena電泳儀、掃描儀和分析系統(tǒng)。▲法國(guó)生產(chǎn)的Sebia電泳儀、掃描儀和分析系統(tǒng)?！鴩?guó)產(chǎn)的金桑特電泳儀、掃描儀和分析系統(tǒng)。6.高效液相色譜儀用于地貧和血紅蛋白病的檢測(cè)國(guó)際地貧協(xié)會(huì)和美國(guó)化學(xué)學(xué)會(huì)推薦使用，直接測(cè)出HbA2和HbF值，6分鐘左右出一個(gè)結(jié)果，變異系數(shù)小，準(zhǔn)確可信，操作方便，結(jié)果判斷簡(jiǎn)單，既可單個(gè)做也可成批大量做，一次可放100個(gè)樣品。已知血紅蛋白病大多可有特別波型，易診斷。7.血細(xì)胞分析平均細(xì)胞體積（MCV）----79平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCH）----27pg8.基因分析缺失
6、型α地貧▲提取DNA ▲PCR擴(kuò)增▲PCR產(chǎn)物電泳分離非缺型α地貧β地貧和非缺失型α地貧▲提取DNA ▲PCR擴(kuò)增 ▲雜交 ▲洗膜 ▲顯色結(jié)果分析：HbA2高于正常（1歲以），MCV，MCH低于正常為β地貧，Hb正常為攜帶者，低于正常為輕型。HbA2不高，MCV，MCH低于正常，有H帶為中間型α地貧（HbH?。?，不貧血或輕度貧血應(yīng)高度懷疑α地貧1（特別是HbA2較低者），應(yīng)建議進(jìn)行基因分析明確診斷。三、地中海貧血的治療1.重型β地貧患者的預(yù)期壽命●不輸血的患兒期望壽命5歲，患兒常會(huì)出現(xiàn)包括不會(huì)走路，發(fā)生病理性骨折和面部畸形等嚴(yán)重癥狀，主要致死原因是貧血，肝功能損害，敗血癥和心衰
7、?！癫灰?guī)則輸血患兒期望壽命13-19歲，但生活質(zhì)量極差，多死于長(zhǎng)期貧血導(dǎo)致的心衰、敗血癥和肝功能損害。●規(guī)則高量輸血但不用除鐵劑期望壽命20歲以上。生活質(zhì)量明顯好于不規(guī)則輸血，主要死因不再是貧血而是鐵負(fù)荷過(guò)量所致的肝硬化、心衰和內(nèi)分泌功能失調(diào)?！褚?guī)則高量輸血和使用除鐵劑可長(zhǎng)期存活。▄2.重型β地貧患者每月所花費(fèi)用按體重20kg計(jì)算該患者每月：輸紅細(xì)胞2單位（240ml）約540元注射除鐵劑得斯芬30支約2100元合計(jì)2640元左右3重型β地貧推薦的輸血方案●維持血紅蛋白在100g/L以上方法
