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1、實時熒光定量PCR介紹寶生物工程（大連）有限公司July16,2021主要內(nèi)容1RealTimePCR基礎(chǔ)知識2RealTimePCR實驗方法3RealTimePCR解析方法4RealTimePCR應(yīng)用實例實時熒光定量PCR介紹July16,2021?2RealTimePCR基礎(chǔ)知識1RealTimePCR基礎(chǔ)知識1.RealTimePCR的用途及原理2.RealTimePCR的檢測方法實時熒光定量PCR介紹July16,2021?3RealTimePCR的用途病毒及病原菌檢測病毒及病原菌定量分析差異顯示結(jié)果驗證物種鑒定導(dǎo)入基因拷貝數(shù)解析基因芯片結(jié)果驗證基因
2、分型GMO定量檢測siRNA效果確認(rèn)mRNA表達量分析實時熒光定量PCR介紹July16,2021?4RealTimePCR的原理RealTimePCR使用RealTimePCR擴增裝置實時監(jiān)測PCR擴增產(chǎn)物并進行分析的方法。發(fā)射激光發(fā)Ct值光實時熒光定量PCR介紹July16,2021?5RealTimePCR的原理同一個樣品重復(fù)96次PCR的擴增曲線Ct值實時熒光定量PCR介紹July16,2021?6RealTimePCR中的概念Ct值概念RealTimePCR擴增過程中，每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號值達到設(shè)定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。(C-代表Cycle，t
3、-代表threshold）閾值：在擴增曲線的指數(shù)增長區(qū)域內(nèi)適當(dāng)位置上設(shè)定的熒光檢出界限。實時熒光定量PCR介紹July16,2021?7RealTimePCR的原理在PCR反應(yīng)體系中加入熒光物質(zhì)，并實時監(jiān)測熒光信號積累的整個PCR進程，最后通過已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知濃度的樣品進行定量分析。實時熒光定量PCR介紹July16,2021?8RealTimePCR檢測系統(tǒng)--簡介生產(chǎn)廠商儀器名稱TaKaRa公司ThermalCyclerDiceTP800AppliedBiosystems公司ABIPRISM7700、7000、7300、7900HT、
4、7500FastRoche公司LightCycler?2.0、LightCycler?480Cepheid公司SmartCycler、SmartCyclerII、SmartCycler?TDBio-Rad公司iCycleriQ、iQ5Real-TimePCRDetectionSystemCorbettResearch公司Rotor-gene2000、Rotor-gene3000、Rotor-gene6000MJResearch公司Opticon、MJMiniCycler、MiniOpticonStratagene公司Mx4000?、Mx3000P?、Mx30
5、05PTM杭州博日LINE-GENEFQD-33A、LINE-GENEFQD-66A實時熒光定量PCR介紹July16,2021?ABIPRISM7500LightCycler?480iQ5Real-TimePCRDetectionSystemTaKaRaTP800MiniOpticonMx3005PTMLINE-GENEFQD-66ARotor-gene6000實時熒光定量PCR介紹July16,2021?各公司RealTimePCR檢測系統(tǒng)比較反應(yīng)孔間ROX熒光儀器名稱反應(yīng)孔數(shù)檢出通道升降溫速度Tube獨立性校正功能TaKaRaDiceTP80096無2
6、-4快0.2ml普通Tube無ABI70004快、慢兩種0.2ml8聯(lián)管、96無有ABI7500Fast5快專用CapLightCycler2.0326快專用毛細(xì)玻璃管無無LightCycler48096or3845快專用板SmartCycler16(6×16)有4快專用、塑料＋石英無36(0.2ml)0.2ml為普通Tube,Rotor-Gene3000無4慢無72(0.1ml)0.1ml為專用TubeMiniOpticon48無2快0.2ml普通Tube無iQ5Real-TimePCR96無5快0.2ml普通Tube無DetectionSystemLIN
7、E-GENE66無4快0.2ml普通Tube無FQD-66AMx3000P?40.2ml8聯(lián)管96無慢有或單管Mx3005PTM5實時熒光定量PCR介紹July16,2021?RealTimePCR基礎(chǔ)知識1RealTimePCR基礎(chǔ)知識1.RealTimePCR的用途及原理2.RealTimePCR的檢測方法實時熒光定量PCR介紹July16,2021?12RealTimePCR的檢測方法熒光染料嵌合法熒光探針法TaqManPCyclingMolecularrobeProbeBeaconetc.實時熒光定量PCR介紹July16,2021?13熒光染料嵌合
8、法（SYBRGreenI）SYBRGreenI：是一
