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1、脂肪酶的分離純化姓名：曹凈凈學號：111411201脂肪酶——應用生物柴油紡織工業(yè)醫(yī)藥洗滌劑工業(yè)食品工業(yè)脂肪酶——結構脂肪酶即三?；视王；饷?，它催化天然底物油脂水解：甘油三酯+水=甘油+游離脂肪酸其氨基酸組成數(shù)目從270~641不等,其分子量為29000~100000。絕大多數(shù)脂肪酶的活性中心都由Ser和His參與組成,His，Ser與另一種氨基酸殘基(如Glu或Asp等)一起構成脂肪酶催化活性中心的三聯(lián)體。脂肪酶——結構殘基261和257的羰基氧原子為Ca2+配基;頂端的α螺旋(淺色的)表示“蓋子”狀結構。當脂肪酶與界面相接觸時,此蓋打開,通過親電子域的創(chuàng)
2、造導致脂肪酶的構象改變,此親電子域在絲氨酸殘基周圍,由疏水殘基的暴露和親水殘基的包埋來完成。這種結構有利于催化過程中底物對活性中心親和力的提高以及活性中間體的穩(wěn)定。“蓋子”是兩性分子結構，在關閉狀態(tài)，酶的結構是親水端面對溶劑，疏水端朝向蛋白質的內(nèi)部，當酶轉變到開放狀態(tài)時，疏水端會暴露出來，隱藏親水殘基團，在絲氨酸殘基周圍形成親電子域，引起脂肪酶的構象改變，增加了酶與脂類底物的親和性，并穩(wěn)定了催化過程中過渡態(tài)中間產(chǎn)物。酶分子周圍通常保留一定量的水分，從而保證了脂肪酶在油/水界面和脂相中的自體激活脂肪酶——來源脂肪酶的來源植物：油料作物的種子動物：高等動物的胰臟和脂肪
3、組織微生物：細菌、酵母菌和霉菌脂肪酶的提取提取法：從動植物器官或組織中提取化學合成法：分析酶的氨基酸組成順序,再用化學方法合成發(fā)酵法：利用微生物的生命活力,通過人工控制而獲得人們所需的酶--假單胞菌屬，黑曲霉，米曲霉影響因子:生產(chǎn)培養(yǎng)基中存在單糖，雙糖或甘油時,脂肪酶的形成常受阻遏脂肪酶的大量生產(chǎn)是在葡萄糖在培養(yǎng)基中消耗完及生長停止時。溫度：脂肪酶的最適作用溫度在30℃~60℃之間，在較高和較低溫度下酶仍具有較高活性。PH:大多數(shù)細菌脂肪酶最適pH在中性或堿性范圍內(nèi)，pH穩(wěn)定范圍一般在pH4.0~11.0之間。真菌脂肪酶pH穩(wěn)定范圍也較寬，通常在pH4.0~10.
4、0之間。（氮源）大豆粉2％(NH4)2SO40.1％（碳源）玉米漿5％K2HPO45.5％聚乙二醇壬基笨醚0.6％脂肪酶——影響因素微生物脂肪酶的發(fā)酵過程無菌空氣脂肪酶的下游分離提取工藝發(fā)酵液預處理過濾菌體洗液（含酶稀溶液）過濾水洗（破碎）濾液+超濾濃縮液粘結劑輔料制粒機造粒涂膜篩分成品顆粒酶無菌過濾硫銨固體酶硫銨回收微生物脂肪酶的下游分離提取工藝發(fā)酵液丙酮轉鼓過濾器50%硫酸銨鹽化上層丙酮下層脂肪酶+丙酮脫水丙酮脂肪酶廢丙酮精餾脫水干燥脂肪酶粉末分析純：2000-3000元/1kg衣物除污脂肪酶：150/1kg食用級脂肪酶：150-500/1kg純化次數(shù)越多，純
5、化倍數(shù)和比活也越高,但得率卻隨之下降。由于經(jīng)過的層析柱較多,成本也較高,因此我們純化微生物脂肪酶所面臨的問題就是不僅要提高純化倍數(shù)和比酶活,還要降低成本。展望謝謝！
