[精品]外成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)與成骨細(xì)胞活性鑒定.doc

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1、兔脂肪干細(xì)胞體外成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)及成骨活性鑒定的實(shí)驗(yàn)研究張開(kāi)剛I張?jiān)聳|I王玫2(1?泰安市屮心醫(yī)院骨科，山東泰安2710002.泰山醫(yī)學(xué)院，山東泰安271016)【摘要】目的體外分離培養(yǎng)兔脂肪干細(xì)胞，在成骨誘導(dǎo)條件下，鑒定其成骨活性。方法取4刀齡新西蘭大白兔腹股溝區(qū)脂肪，1型膠原酶消化，分離、培養(yǎng)及傳代原細(xì)胞，將第3代ADSCs消化后，加入成骨培養(yǎng)液屮誘導(dǎo)分化，分別行堿性磷酸酶染色、茜素紅染色、VonKossa(鈣結(jié)節(jié))染色鑒定分化結(jié)果.結(jié)果體外分離培養(yǎng)的細(xì)胞增殖活躍，成骨誘導(dǎo)后檢測(cè)堿性磷酸酶染色、茜索紅染色、VonKossa(鈣結(jié)節(jié))染色均呈陽(yáng)性表達(dá)。結(jié)

2、論脂肪干細(xì)胞具有成骨分化能力，是-?種理想的骨組織工程種子細(xì)胞?！娟P(guān)鍵詞】脂肪干細(xì)胞；成骨誘導(dǎo)；種子細(xì)胞Anexperimentalstudyofosteogeniccultureinvitroandidentificatingtheosteogenicactivityofrabbitadipose-derivedstemcellsZHANGKaigang1,ZHANGYuedong1,WangMei2(1.DepartmentofOrthopedicSurgery,TaianCenterHospital,ShandongTaian,2710002.T

3、aishanMedicalCollege,ShandongTaian271016)[Abstract]ObjectiveSeparatingandCulturingrabbitadipose-derivedstemcells,identificatingtheosteogenicactivityinosteogenicconditions.MethodsExtractinginguinalfatofNewZealandwhiterabbitsaged4months,UsingIcollagenasedigestiong,separating,cultu

4、ringandpassagingoftheoriginalcells,addingosteogenicmediumtoinduceosteogenicdifferentiationafterdigestingthe3rdgenerationADSCs,thenidentificatingthedifferentiationresultsbyalkalinephosphatasestaining、alizarinredstaining>VonKossa(calciumnodules)staining.ResultsThecellsofSeparating

5、andCulturinginvitrowereactive,thealkalinephosphatasestaining、alizarinredstainingandVonKossa(calciumnodules)stainingwerebothpositiveexpressionafterosteogenic.ConclusionAdiposederivedstemcellshavetheabilityofOsteogenicdifferentiation,theyareanidealseedcellsforbonetissueengineering

6、.[Keywords!Adipose-DerivedStemCells;Osteogenic;SeedCells脂肪T?細(xì)胞(adipose?derivedstemcells,ADSCs)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一，種成體干細(xì)胞，2001年，Zuk（1）等首次從人的脂肪組織懸液屮分離出了具有與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞類似，可以在體外穩(wěn)定増殖、具有多向分化潛能的脂肪干細(xì)胞。因具有來(lái)源豐富、取材方便、對(duì)機(jī)體的損傷小、增殖快、能多向分化等優(yōu)點(diǎn),迅速成為組織工程學(xué)、再生醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。木實(shí)驗(yàn)通過(guò)分離培養(yǎng)兔脂肪干細(xì)胞,研究其成骨分化能力，探討其作為骨組織工程種子細(xì)胞的可行性

7、。1.材料和方法1.1材料1.1.1主要試劑和儀器I型膠原酶（sigma美國(guó)）；丿炭蛋白酶（sigma美國(guó)）；地塞米松（si莒ma美國(guó)）；維生素C（sigma美國(guó)）；B—甘油磷酸鈉（sigmj美國(guó)）；高糖DMEM（Gibco美國(guó)）；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；堿性磷酸酶染色試劑盒（華美生物工程公司）；四環(huán)素（華美生物工程公司）；茜素紅（Amersco美國(guó)）；EDTA（華美牛物工程公司）；恒溫CO2培養(yǎng)箱（QueueSystemsCompany美國(guó)）；病理切片機(jī)（leica德國(guó)）。1.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物4月齡健康新西蘭大白兔（體重2.0—2.

8、5kg,雌雄不拘，泰山醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物屮心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK（魯）2005—0