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《針對(duì)豬圓環(huán)病毒的檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、針對(duì)豬圓環(huán)病毒的檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展豬圓環(huán)病毒病是由豬圓環(huán)病毒(PCV)感染引起的，以免疫抑制為特征的一類病毒性傳染病，臨床表現(xiàn)主要是由PCV-2引起的仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征。文章就近幾年國內(nèi)外對(duì)該病毒檢測(cè)技術(shù)，包括病毒分離、電鏡觀察、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、間接免疫熒光試驗(yàn)、免疫組織化學(xué)技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、原位核酸雜交試驗(yàn)等的研究進(jìn)展做了闡述。豬圓環(huán)病毒病是近年來倍受關(guān)注的一種在世界各地廣泛存在的慢性疾病，是一系列疾病的總稱。自1974年Tischerl等首次發(fā)現(xiàn)豬圓環(huán)病毒(Porcinecircovirus,PCV)以來，隨
2、著對(duì)PCV研究的深入，根據(jù)豬圓環(huán)病毒的致病性及其基因組差界乂可將其分為無致病性的豬圓環(huán)病毒1型(PCV-1)和有致病性的豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)oPCV-1對(duì)豬無致病性，但能產(chǎn)生血清抗體，在豬群屮普遍存在，接種2日齡與9日齡的豬無臨床癥狀。PCV-2對(duì)豬有致病性，主要導(dǎo)致一種以斷奶仔豬呼吸急促或困難、腹瀉、貧血、明顯的淋巴組織病變和進(jìn)行性消瘦為特征的新的疾病，即斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(Postweaningmultisystemicwastingsyndrome,PMWS),造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失。由于豬群屮普遍存在著P
3、CV抗體，單一的抗體陽性不能確診為陽性，確診必須依靠實(shí)驗(yàn)室方法檢測(cè)出PCV-2抗原或核酸。由于病毒復(fù)制困難，所以檢測(cè)和防控研究非常困難。同吋，該病易與一些病毒性和細(xì)菌性疾病混合或繼發(fā)感染，因此僅憑癥狀、病變及流行病學(xué)調(diào)查很難做出準(zhǔn)確判斷。為此，各國獸醫(yī)工作者進(jìn)行了大量的研究，建立了多種高度特異性的病毒學(xué)、免疫學(xué)和分子生物學(xué)診斷方法。文章就H前國內(nèi)外PCV的檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。1病毒分離豬圓環(huán)病毒的分離培養(yǎng)多數(shù)是從病豬屮采取肺、肝、脾、淋巴結(jié)和扁桃體等組織，制成組織勻漿，用氯仿處理除去有囊膜的病毒，接種PK-15細(xì)胞，利
4、用氨基葡萄糖短時(shí)間處理感染細(xì)胞，以促進(jìn)病毒的增殖。呂艷麗等從北京、河北分離了3株P(guān)CV-2,并對(duì)其屮的2株進(jìn)行了測(cè)序，序列分析比較發(fā)現(xiàn)，它們與歐美分離:毒株具有很高的同源性。郎洪武等用Dulac豬腎傳代細(xì)胞分離到了2株圓環(huán)病毒。崔尚金等從我國的22個(gè)省市分離到了32株豬圓環(huán)病毒，并對(duì)其屮6株進(jìn)行了測(cè)序，呈送到GenBanko另外，還有很多研究人員從各地分離到多株豬圓環(huán)病毒。2電鏡觀察電鏡下可以觀察到一種較小病毒，是豬圓環(huán)病毒特有的直徑約為17mn的球型結(jié)構(gòu)，以及大量不同形態(tài)的胞漿內(nèi)包涵體。3聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(
5、PCR)做為一種快速、簡(jiǎn)便、特異的診斷方法，F(xiàn)l前為病毒學(xué)診斷、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)最常用的技術(shù)，其優(yōu)點(diǎn)為敏感、特異、快速、準(zhǔn)確。在PCV的檢測(cè)方面應(yīng)用廣泛，且發(fā)展了很多改良的技術(shù)。3.1多重PCR檢測(cè)HuangCI等建立了一種簡(jiǎn)單的多重PCR法，可對(duì)PCV進(jìn)行檢測(cè)和定型。該方法設(shè)計(jì)了兩套引物,是根據(jù)PCV核酸鏈上的ORF1和ORF2設(shè)計(jì)的。CalsamigliaM等建立了一種多重PCR法，可對(duì)PCV進(jìn)行檢測(cè)和定型。作者根據(jù)PCV-1和加拿大PMWS豬中分離的PCV-2的ORF1和0RF2序列設(shè)計(jì)兩套引物,這兩套引物都可以對(duì)PCV
6、進(jìn)行檢測(cè)和定型。郎洪武等根據(jù)PCV種的特異性和PCV-2型的特異性，設(shè)計(jì)兩對(duì)PCR引物，進(jìn)行多重PCR檢測(cè)PCV。一對(duì)引物擴(kuò)增出的片段具有PCV種的特杲性，擴(kuò)增區(qū)域是相對(duì)保守的0RF1部分核背酸片段，大小約為900bPo另一對(duì)引物擴(kuò)增出的片段具有PCV-2型的特杲性，擴(kuò)增區(qū)域呈可變性相對(duì)較大的0RF2部分的核昔酸片段，大小約為470bpoKi町等在2003年建立了石蠟包埋組織屮同吋檢測(cè)PCV-1.PCV-2和PPV多重套式PCR法，檢測(cè)了人工感染病例和自然感染病例，結(jié)果與原位雜交方法完全一致。3.2定量競(jìng)爭(zhēng)性PCR檢測(cè)定量P
7、CR是根據(jù)PCR的產(chǎn)物量來推斷其原始模板量。LiuQ等建立了競(jìng)爭(zhēng)性PCR方法檢測(cè)血清中的PCV的DNAo選取PCV-1和PCV-2的0RF2中變異性高的區(qū)段設(shè)計(jì)兩對(duì)型特并性引物，并引入一個(gè)外源片段的重組質(zhì)粒，以此作為競(jìng)爭(zhēng)性模板，用上述兩對(duì)引物擴(kuò)增出的PCV-1或PCV-2片段能夠與野毒株的擴(kuò)增片段和區(qū)別。半倍比稀釋的已知濃度的質(zhì)粒DXA和待測(cè)DXA共同的PCR產(chǎn)物的電泳條帶亮度相同吋，便可以推算出待測(cè)DYA的濃度。崔尚金等運(yùn)用此方法在試驗(yàn)過程屮采用內(nèi)標(biāo)競(jìng)爭(zhēng)模板，競(jìng)爭(zhēng)模板和F1標(biāo)模板共用一個(gè)反應(yīng)體系，不僅降低了非內(nèi)標(biāo)性模板不同
8、PCR反應(yīng)管間的差異，而且在對(duì)樣本進(jìn)行質(zhì)控監(jiān)測(cè)，排除了假陰性結(jié)果。3.3復(fù)合PCR檢測(cè)復(fù)合PCR是一種特殊的PCR技術(shù)，即在同一反應(yīng)體系屮加入多對(duì)引物，擴(kuò)增多個(gè)基因片段，此法方便快捷，已廣泛用于醫(yī)學(xué)臨床診斷。蘆銀華等應(yīng)用復(fù)合PCR,在同體系屮用3條引物擴(kuò)增PCV兩種血清型的DNA片段，從而
