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《豬圓環(huán)病毒檢測技術(shù)相關(guān)探究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、豬圓環(huán)病毒檢測技術(shù)相關(guān)探究摘要：豬圓環(huán)病毒能引起豬圓環(huán)病，對聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗、間接免疫熒光試驗、原位核酸雜交試驗、電鏡檢查等檢測方法進(jìn)行綜述。檢測豬圓環(huán)病毒是屬于圓環(huán)病毒屬，圓環(huán)病毒科其DNA為單鏈，是目前發(fā)現(xiàn)的最小的動物病毒。癥狀為：腹瀉、呼吸困難、皮膚蒼白、漸進(jìn)性消瘦和體質(zhì)下降，現(xiàn)對研究情況進(jìn)行綜述。1聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測方法1.1常規(guī)PCR由于常規(guī)PCR檢測有著快速、簡便、特異性高的特點(diǎn)，它成為了常用的檢測方法。我們從細(xì)胞及組織中直接用水煮法提取核酸，根據(jù)PCV2的基因序列來設(shè)計出其PCR引物，進(jìn)行PCR檢測，這種操作簡單，有時存在假陽性P
2、CR污染的現(xiàn)象。1.2套式PCR需要節(jié)省模版和需要高敏感性時可以選用套式PCR,即：外側(cè)引物為647bp和內(nèi)側(cè)引物219bp,將這2種引物擴(kuò)增2次將外側(cè)引物的DNA含量擴(kuò)增到5?10mg/mLo趙浩軍等根據(jù)套式PCR檢測方法，利用這2對PCV2特異性引物，對656份臨床發(fā)病的淋巴結(jié)和肺樣品進(jìn)行了PCV檢測，結(jié)果有30份樣品檢測出PCV,其平均陽性率比普通的PCR檢測靈敏度高。杭柏林等（2008）根據(jù)GenBank中PCV2的核昔酸序列，成功設(shè)計并合成了一對特異性引物，從而建立一種檢測地方分離株P(guān)CV2的PCR方法口］。1.3熒光定量PCR檢測PCV-2的方法還有熒光定量
3、PCR技術(shù)，McintoshKA等利用該方法成功的從腸系膜淋巴結(jié)、血清、心肌層、肝臟、糞便、腎臟中檢測出PCV-2o2酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗（E口SA）酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗的流程為：包被一添加待測抗體，再加酶標(biāo)記抗體，使之生成抗原■待測抗體■酶標(biāo)記抗體的復(fù)合物-將復(fù)合物與該酶的底物反應(yīng)，生成有色產(chǎn)物一利用分光光度計來計算抗體的量，待測抗體的量與有色產(chǎn)物成正比。ELISA最常用的方法有：競爭法測定抗原、間接法測定抗體、雙抗體夾心法測定抗原。因為ELISA檢測方法適合大規(guī)模的檢測，具有檢測速度快、特異性高、敏感性高的特點(diǎn)，非常適合血清學(xué)檢測。郎洪武等通過該法對豬血清感染PCV2的48
4、4份血清進(jìn)行檢測，其檢測的結(jié)果說明，該法能夠?qū)ωi圓環(huán)病毒進(jìn)行大規(guī)模的檢測，其敏感性高于免疫熒光方法［2］。3間接免疫熒光實(shí)驗（IIF）該方法用于PCV的定型和檢測，通過檢測豬血清中的PCV抗體，就能確定豬是否存在PCV的感染以及感染的程度。但是這種方法不能區(qū)分該抗體到底是屬于哪種抗體，陳慶新等對杭州地區(qū)28個豬場的豬，利用間接熒光免疫實(shí)驗來檢測血清中的PCV抗體，通過比較各種反應(yīng)物的濃度及反應(yīng)的時間，建立了PCV抗體的間接免疫熒光檢測技術(shù),此方法可用于PCV抗體水平的檢測［3］。4原位核酸雜交試驗（ISH）在該方法中，應(yīng)用的加強(qiáng)快速雜交方法比傳統(tǒng)的雜交方法檢測時間大大縮
5、短，更加適合于PCV的檢測，其在細(xì)胞中能精確地確定PCV病毒DNA的位置，而且敏感性高。姚鑫等利用該方法檢測臨床組織中的PCV與PCR基本一致，建立了直接從細(xì)胞和組織中檢測和定位PCV的原位雜交檢測方法。5電鏡檢查對豬圓病毒進(jìn)行檢查時，利用電鏡觀察病毒細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)感染病毒的細(xì)胞中有大量的散在細(xì)胞漿內(nèi)包涵體，這些包涵體由大量的直徑為20nm的電子致密顆粒組成，其排列方式為晶體狀，在電鏡下能看到負(fù)染后的含有感染PCV病豬的提取物的病毒顆粒。在我國豬群感染豬圓環(huán)病毒上升速度快，對養(yǎng)豬業(yè)造成經(jīng)濟(jì)損失，到目前為止沒有能控制該病的有效疫苗，這就需要我們發(fā)展特異性高、靈敏度高、簡便快速
6、的檢測方法，這是我們研究的重點(diǎn)。雖然建立了多種檢測豬圓環(huán)病毒的方法，但是單一的檢測還不能解決所有的問題，研究出一種快速、靈敏、特異、檢出率高的方法，是我們的當(dāng)務(wù)之急。參考文獻(xiàn)[1]郎洪武，張廣川，吳發(fā)權(quán)，等.斷奶豬多系統(tǒng)衰弱綜合癥血清抗體檢測.中國獸醫(yī)科技，2000(3):3-5.[2]陳慶新，商紹彬，葉菊秀，等.杭州地區(qū)豬II型環(huán)病毒抗體的血清學(xué)調(diào)查?中國獸醫(yī)科技,2003,33(7):26-28.[3]姚鑫，楊漢春，郭鑫，等.豬圓環(huán)病毒2型原位雜交檢測技術(shù)的建立與應(yīng)用?畜牧獸醫(yī)學(xué)報,2007(2):169-174.畢業(yè)論文
