生物化學(xué)水楊酸比色定糖法.ppt

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1、實驗一3,5—二硝基水楊酸比色定糖法目的和要求1.掌握3,5—二硝基水楊酸比色法定糖的原理及方法。2.用3,5—二硝基水楊酸定糖法測定樣品中的總糖及還原糖。實驗原理3,5----二硝基水楊酸與還原糖共熱后被還原成棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)，還原糖的量和反應(yīng)液的顏色強度呈現(xiàn)比例關(guān)系，利用比色法可測知樣品的含糖量。該方法是半微量測糖法，操作簡便，快速，雜質(zhì)干擾較小。實驗步驟一、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取9支大試管，分別按下表順序加入各種試劑：將上述各管溶液混勻后，用721型分光光度計（520nm）進(jìn)行比色測定，用空白管溶液調(diào)零點，記錄光密度值。以葡萄糖濃度為

2、橫坐標(biāo)，光密度值為縱坐標(biāo)繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。二、樣品中總糖和還原糖含量的測定1.樣品中還原糖的提取：準(zhǔn)確稱取1g樣品，放入50或100ml燒杯內(nèi)，加入85％乙醇30ml，混勻，在50℃恒溫水浴中保溫30min，過濾，濾渣再用85％乙醇提取二次。將濾液合并，蒸去乙醇，加少量水，移入50ml容量瓶中，用水定容，備用。2.樣品中總糖的水解及提?。簻?zhǔn)確稱取樣品1g，放入大試管中，加入1ml6mol/L鹽酸和15ml蒸餾水。混勻，在沸水浴中加熱半小時后，用碘化鉀－碘溶液檢查水解程度，若已水解完全，則不呈現(xiàn)藍(lán)色。冷卻后加入酚酞指示劑1滴。以10％氫氧化鈉中和至溶液呈微紅色

3、。過濾并定容至100ml。再精確吸取上述溶液10ml，放入100ml容量瓶中，定容，備用。3.樣品中含糖量的測定：取7支大試管，分別按下表加入各種試劑：將各管混勻后，按制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時同樣的操作測定各管的光密度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的還原糖含量，按下述公式推算出山芋粉內(nèi)還原糖與總糖的百分含量。思考題1.比色測定的操作要點是什么？方法的基本原理是什么？2.721型分光光度計的原理及使用時的注意事項是什么？3.比色測定時為什么要設(shè)計空白管？4.總糖包括哪些化合物？