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《具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的海綿共附生微生物及其活性產(chǎn)物研究.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、具有0c一葡萄糖苷酶抑制活性的海綿共附生微生物及其活性產(chǎn)物研究摘要海綿共附生微生物是尋找和開發(fā)天然活性產(chǎn)物的重要來源之一，是研制糖尿病新型藥物(0【．葡萄糖苷酶抑制劑)的有效途徑。本研究通過建立0【．葡萄糖苷酶活性抑制劑篩選模型，對(duì)美國圣璜島海域海綿的附生微生物發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行活性篩選。其中，0【．葡萄糖苷酶活性測試體系是在96孔酶標(biāo)板中進(jìn)行，在O【．葡萄糖苷酶濃度為0．008U／mL，pH值為6．8，反應(yīng)溫度37。C，測定產(chǎn)物波長為405nm的基礎(chǔ)上，優(yōu)化篩選模型。結(jié)果表明，模型的最佳篩選條件：底物PNPG濃度為10mmol／L、活性測試反應(yīng)時(shí)間為25min，以及樣品溶劑
2、DMSO含量為2％V／V。以0【．葡萄糖苷酶抑制劑阿卡波糖作為陽性對(duì)照樣品，利用上述優(yōu)化后的抑制活性篩選模型，對(duì)212株海綿微生物的粗提物樣品進(jìn)行篩選。結(jié)果表明：19株微生物的粗提物抑制率大于50％；其中，對(duì)于抑制活性最高的5株菌的粗提物，在濃度為0．4、0．6或0．8rag／mE時(shí)，其抑制活性均在70％以上，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于阿卡波糖的最高抑制率58％(1．6mg／mL)。其中菌株HY936粗提物濃度在0．4mg／mL$-j，仍具有很高的0【．葡萄糖苷酶抑制率79．3％。并對(duì)菌株HY936進(jìn)行16SrDNAi貝U序及分析，鑒定該菌株為堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌(Bacillusfirmus)
3、。本研究還對(duì)活性菌株Bacillusfirmus的培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化。采用的單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以培養(yǎng)時(shí)間，搖床轉(zhuǎn)速，接種量作為分析因素；正交試驗(yàn)驗(yàn)設(shè)計(jì)L9(34)，以蛋白胨、酵母膏、NaCl和pH值作為分析因素；從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中確定適合菌株Bacillusfirmus生長的最佳條件。然后，對(duì)菌株進(jìn)行批量發(fā)酵，收集到粗提物2．89，將其代謝產(chǎn)物通過硅膠薄層層析，高效分析液相等方法分離純化。其中，硅膠柱粗分得到的組分Fr．1和Fr．4具有很高的0【一葡萄糖苷酶抑制活性，抑制率分別為35．5％、19．6％。對(duì)組分Fr．1作進(jìn)一步的分離純化，得到的組分II對(duì)O【．葡萄糖苷酶的抑制率達(dá)
4、82．38％。通過GC．MS鑒定出組分II中的11種化合物，主要成分是環(huán)二肽類和哌啶酮類物質(zhì)，這為研制新型Cc．葡萄糖苷酶抑制劑提供了有力的線索，對(duì)這兩類物質(zhì)有待作進(jìn)一步的研究。關(guān)鍵詞：海綿共附生微生物；n．葡萄糖苷酶抑制劑；分離純化；活性化合物伐一glycosidaseinhibitorderivedfrommarinesponge--associatedmicroorganismsAbstractMarinesponge．a(chǎn)ssociatedmicroorganismsaretheimportantsourceofnatureproductsforpharmaceu
5、ticals．Itisapotentialwayfordevelopingnewdiabetesdrug(0【。glycosidaseinhibitor)·Inthisstudy,thea。glucosidaseinhibitoryactivityscreeningmodelisbuilt—uptosearchfortheactivecrudeextractfromthemicroorgainismmetabolitesamplespreparedfrommarinespongesinFridayharborofUS．Thereactionsystemofthe0【-g
6、lucosidaseinhibitoryactivityscreeningisperformedona96wellsplates．Thereactioncondition，includingtheconcentrationofenzymes，issetat0．008U／mL，pH6．8，37。C，andwavelength405nm．Moreover,thescreeningmodelwasoptimizedwithreactantPNPGconcentration10mmol／L，reactiontimeof25minandthesolventDMSOcontento
7、f2％(∥功UsedAcarboseasapositivecontrolledsample，212crudeextractssamplesfrommarinespongeassiciatedmicroorganismswerescreenedwiththeaboveoptimizedmodel．Theresultsindicatedthatmetabolitesof19strainshadhighinhibitioryactivity(>50％)．Amongthem，5strainsshowedinhibitoryeffecthigher
