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《植物愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配制.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、中—國(guó)海洋大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告姓名:課程:馬寧專業(yè)年級(jí):牛命基地班2009級(jí)學(xué)號(hào):植物牛?理學(xué)實(shí)驗(yàn)040212009020題植物愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配制一?實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握植物組織培養(yǎng)基母液配制的原則。2、掌握植物MS培養(yǎng)基的配制方法。3、學(xué)會(huì)使川高壓滅菌鍋。學(xué)會(huì)植物紐織含水最、自由水和束縛水含量的測(cè)定二?實(shí)驗(yàn)原理概念：1.植物組織培養(yǎng)：將植物的器官組織以至單個(gè)細(xì)胞，應(yīng)用無菌操作方法，使其在人工條件下，能夠分裂、增殖、分化發(fā)冇成一完整植株的過程。2.愈傷組織及脫分化、再分化：植物的組織在人工培養(yǎng)條件下，原來已經(jīng)分
2、化停止生長(zhǎng)的細(xì)胞，可以重新分裂，形成沒有纟R織結(jié)構(gòu)的細(xì)胞團(tuán)，即愈傷組織，這一過稈稱為“脫分化作用”。而已經(jīng)“脫分化”的愈傷組織，在一定條件下，又能重新分化形成輸導(dǎo)系統(tǒng)以及根和芽等組織和器官,這一過稈稱為“再分化作用”。植物激素在“再分化”過稈屮起著重要作用，生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比例，決定了根和芽的分化。培養(yǎng)基配置見下表化合物含量mg/L母液吸取母液量ml/L編號(hào)濃度mg/ml稱量mg配制量mlNH4NO316501331650050025KNOj19003819000KH2PO41703.41700MgS
3、O4.7H2O3707.43700CaCl2.2H2O44028.8440050025ZnSO4.7H2O8.630.864305005MnSO4.4H2O22.32.231115H3BO36.20.62310NaMoO4.2H2O0.2540.251255000.5CuSO4.5H2O0.0250.02512.5CoC12.6H200.0250.02512.5KI0.8350.08341?55005Na-EDTA37.367.4637305002.5FeSO4.7H2O27.85.562780鹽酸硫胺素
4、0.17125250.05鹽酸毗多醇0.58125250.25肌醇1009201000502.5甘氨酸210150501煙酸0.511125250.25三?主要儀器試劑三蒸水、蔗糖、瓊脂、用分析純?cè)噭篘H4N03、KN03、KH2P04、MgS04?7H20、CaC12?2H20、ZnS04?7H20、MnS04*4H20.H3B03預(yù)先配制好的不同纟ft分的培養(yǎng)基母液、2-4D溶液、燒杯、移液管、鐵缸了、玻璃棒、手套、加熱器等。四?實(shí)驗(yàn)操作步月1、母液的配制（教師配好）1）配制母液的好處和原則（1）好
5、處a.可減少每次配制稱量藥品的麻煩.b.減少極微量藥品在每次稱量時(shí)造成的誤差。母液配成10?100倍,2~4°C冰箱屮保存，用時(shí)按比例稀釋。（2）原則：按照藥品的種類和性質(zhì)（相似）分別配制，避免形成沉淀。2）實(shí)驗(yàn)屮用到的各母液（1）大量元素混合母液：指濃度大于0.5mmol/L的元素，即含N、P^K、Ca>Mg、S等六種鹽類的混合溶液，可配成10倍母液?！咀⒁馐马?xiàng)】a.各化合物必須充分溶解后才能混合。b.混合時(shí)注意先后順序，特別要將鈣離了與硫酸根離了，磷酸根離了錯(cuò)開，以免產(chǎn)生硫酸鈣、磷酸鈣等不溶性化合物沉
6、淀。c.混合時(shí)要慢，邊攪拌邊混合。（2）微量元素混合母液：指濃度小于0.5mmol/L的元素,即含除Fe以外的B、Mn、6、Zn、Mo、Cl等鹽類的混合溶液。一般配成100倍其至1000倍。（3）鐵鹽母液（4）鈣鹽母液：必須單獨(dú)配制，若同其他無機(jī)元素混合配成母液，易造成沉淀。（5）有機(jī)營(yíng)養(yǎng)母液：主要是維生素和氨基酸類物質(zhì)。必須分別配成單獨(dú)的母液。（）.1、1.0、10mg/mlo（6）植物激素：?jiǎn)为?dú)配制成母液。0.1、0.5、l.Omg/mba.IAA.IBA、GA3先溶于少量95%酒精，再加水定容。b.
7、NAA可溶于熱水或少量95%的灑精屮，再加水定容。c.2,4-D不溶于水，可用lmolNaOH溶解后，再加水定容。d.KT和6-BA先溶于少量lmol的HC1中，再加水定容。e.玉米素先溶于少量95%酒精中或NaOH,再加水定容。2、MS培養(yǎng)基的配置（1）向洗凈的大搪瓷缸加三蒸水至大約400ml；（2）將儲(chǔ)存母液按順序擺放好；（3）按照配方并根據(jù)欲配制的總體積，量取各種不同體積的母液；（4）加入2,4-D（2mg/L）；（5）稱取加入蔗糖（濃度3%）,調(diào)節(jié)pH至5.7-5.S【此時(shí)可以偏酸抵消加熱后的酸度
8、偏差】;（6）加入瓊脂?9g/L）加熱攪拌溶解，沸騰麻立即端離火源（第一個(gè)大氣泡從缸底上升頂破泡沫層），趁熱分裝在100ml的三角培養(yǎng)瓶屮（一般以容器的1/3?1/4體積為宜），擰緊瓶蓋。（7）放入高壓蒸汽火菌鍋火菌，1.1kg?cm?2,121°C保持15?20分鐘即可。3、培養(yǎng)基的存放經(jīng)高壓滅菌的培養(yǎng)基凝I古I示，宜放在培養(yǎng)室屮預(yù)培養(yǎng)3?5天，若沒有污染才可使用。暫時(shí)不用的培養(yǎng)基應(yīng)放置在io°c以下保存，而含有生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)
