植物愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)--李老師

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1、植物組織培養(yǎng)基的配制與植物愈傷組織誘導(dǎo)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?；通過植物組織培養(yǎng)基和植物愈傷組織誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)的學(xué)習(xí)和訓(xùn)練，使學(xué)生了解植物組織培養(yǎng)的基本原理和操作技術(shù)，初步掌握MS固體培養(yǎng)基制備方法、外植體的常規(guī)滅菌技術(shù)以及愈傷組織誘導(dǎo)方法。二、實(shí)驗(yàn)原理：根據(jù)植物細(xì)胞全能性原理，培養(yǎng)植物材料。即在無菌條件下，將植物的器官或組織（如芽、莖尖、根尖或花藥）放在人工培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，通過細(xì)胞分裂，形成一團(tuán)薄壁細(xì)胞，即愈傷組織。愈傷組織可以在適宜的光照、溫度和一定的營養(yǎng)物質(zhì)與激素等條件下進(jìn)行再分化，重新產(chǎn)生出植物的各種器官和組織，進(jìn)而發(fā)育成完整的植株

2、。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)包括以下3部分內(nèi)容：實(shí)驗(yàn)1-1、植物組織培養(yǎng)基母液的配制和保存實(shí)驗(yàn)1-2、MS培養(yǎng)基的配制與滅菌實(shí)驗(yàn)1-3、胡蘿卜愈傷組織的誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)1-1植物組織培養(yǎng)基母液的配制和保存1、目的要求學(xué)習(xí)植物組織培養(yǎng)基母液的配制方法，為培養(yǎng)基的配制做準(zhǔn)備。2、基本原理?15植物培養(yǎng)基是植物離體培養(yǎng)的組織或細(xì)胞賴以生存的營養(yǎng)基質(zhì)，是為離體培養(yǎng)材料提供近似活體生存的營養(yǎng)環(huán)境，主要包括水、大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)復(fù)合物、糖、凝固劑和植物生長調(diào)節(jié)等物質(zhì)。在配制培養(yǎng)基前，為了使用方便和用量準(zhǔn)確，常常將培養(yǎng)基成分首先配制成比實(shí)際培養(yǎng)

3、基濃度大若干倍的母液，然后在配制培養(yǎng)基時(shí)，再根據(jù)所需濃度，按比例稀釋。本實(shí)驗(yàn)以MS培養(yǎng)基為例，學(xué)習(xí)培養(yǎng)基母液的配制。MS培養(yǎng)基母液可分為：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS鐵鹽母液和MS有機(jī)化合物母液等。另外，還要配制生長激素母液，在不同類型的培養(yǎng)基中使用。3、實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備和試劑3.1儀器、用具分析天平、酸度計(jì)（或pH試紙）、冰箱、藥匙、玻棒、稱量紙、滴管、洗瓶、記號筆、燒杯（50ml、100ml、200ml）、容量瓶（100ml、500ml、1000ml）、磨口試劑瓶（100mL、200mL、500ml、1000ml

4、）、量杯、量筒、移液搶、微波爐等。3.2試劑（1）95%乙醇、1mol/LNaOH、1mol/LHCl。（2）MS培養(yǎng)基成分：15①大量元素(母液Ⅰ)：NH4NO3、KNO3、CaCl2.2H2O、MgSO4.7H2O、KH2PO4；②微量元素(母液Ⅱ)：KI、H3BO3、MnSO4.4H2O、ZnSO4.7H2O、Na2MoO4.2H2O、CuSO4.5H2O、CoCl2.6H2O；③鐵鹽(母液Ⅲ)：FeSO4.7H2O、Na2.EDTA.2H2O；④有機(jī)成分(母液,維生素和氨基酸)：肌醇、鹽酸吡哆醇(維生素B6)、煙酸(

5、Vpp)、鹽酸硫胺素(維生素B1)、甘氨酸；（3）植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)：2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。4、操作步驟（1）MS大量元素母液的配制按照培養(yǎng)基配方的用量，把各種化合物擴(kuò)大10倍，按照表1中的次序分別準(zhǔn)確稱量后，分別用50ml燒杯，加入蒸餾水30ml溶解（可以加熱至60℃～70℃，促其溶解）。溶解后，按順序倒入一大燒杯中（燒杯中事先加入約50ml的蒸餾水，目的避免由于鹽濃度過高使鈣離子與磷酸根離子、硫酸根離子形成不溶于水的沉淀），注意最后加入氯化鈣溶液，混勻，用250mL容量瓶定容。將配制好的母液倒入試劑瓶中，貼好

6、標(biāo)簽，注明母液名稱、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。?MS培養(yǎng)基大量元素母液（10倍）的配制劑量母液化合物名稱擴(kuò)大倍數(shù)稱取量(mg)母液體積(mL)15培養(yǎng)基用量（mg/L）1L培養(yǎng)基吸取母液量（mL）大量元素KNO31,900104,750250100NH4NO31,6504,125MgSO4·7H2O3709,25KH2PO470425CaCl2·2H2O4401,100（2）微量元素母液的配制按照培養(yǎng)基配方的用量，將微量元素各種化合物（除去鐵鹽）擴(kuò)大100倍（表2），用萬分之一天平分別準(zhǔn)確稱取，可以混合

7、溶解，最后定容。將配制好的母液倒入試劑瓶中，貼好標(biāo)簽，注明母液名稱、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩１?MS培養(yǎng)基微量元素母液（100倍）的配制劑量母液化合物名稱培養(yǎng)基用量（mg/L）擴(kuò)大倍數(shù)稱取量(mg)母液體積(mL)1L培養(yǎng)基吸取母液量（mL）微量MnSO4·4H2O22.31002231001015元素ZnSO4·7H2O8.686H3BO36.262KI0.838.3Na2MoO4·2H2O0.252.5CuSO4·5H2O0.02510ml*CoCl2·6H2O0.02510ml***、**：因天平

8、均存在誤差，為減少誤差帶來的影響，建議稱取0.25g，溶解并定容至10ml容量瓶中，然后移取10ml，加入混合液中。（3）鐵鹽母液的配制常用的鐵鹽是FeSO4·7H2O和Na2-EDTA的螯合物，必須單獨(dú)配成母液。配制時(shí)，按照擴(kuò)大后的用量（表3），分別稱取FeSO4·7H2O和Na2-ED