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《海洋放線菌基因組文庫的構建和功能基因的克隆及序列分析.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在工程資料-天天文庫。
1、LibraryConstructwithGenomicDNAFragmentsandCloningfunctionGeneoffromMarineactinomyceteandSequenceanalysis么碭esisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheM．S．DegreeinBiochemistryandMolecularBiology{ByMaYanlingPostgraduateProgramCollegeofLifeSciencesCentralChina
2、NormalUniversitySupervisor：QiChaoLiAiyingAcademicTitle：Professor,AssociateProfessorSignature盈j幽ApprovedMay,2011f⑨碩士學位論文MASTER’STHESIS華中師范大學學位論文原創(chuàng)性聲明和使用授權說明原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學位論文，是本人在導師指導下，獨立進行研究工作所取得的研究成果。除文中已經標明引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出貢獻的個人和集體，均已在文中
3、以明確方式標明。本聲明的法律結果由本人承擔。日期：Pot／年夕月-70日學位論文版權使用授權書學位論文作者完全了解華中師范大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即：研究生在校攻讀學位期間論文工作的知識產權單位屬華中師范大學。學校有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許學位論文被查閱和借閱；學?？梢怨紝W位論文的全部或部分內容，可以允許采用影印、縮印或其它復制手段保存、匯編學位論文。(保密的學位論文在解密后遵守此規(guī)定)保密論文注釋：本學位論文屬于保密，在——年解密后適用本授權書。非保密論文注釋：本學位論文不屬于保密范
4、圍，適用本授權書。、厶作者簽名：a锨導師簽名：忉蘭暨日期：測f年羅月=}。日日期：》叫年步月弓6日本人已經認真閱讀“CALIS高校學位論文全文數據庫發(fā)布章程”，同意將本人的學位論文提交“CALIS高校學位論文全文數據庫"中全文發(fā)布，并可按“章程”中的規(guī)定享受相關權益?；赝救胀筮M卮；旦圭生；．旦二生；旦三生蕉查!作者簽名：召锨日期．幻忤歲月弓DE1，1／基”卻牙名“娩m師期寧日⑨碩士學位論文MASTER’STHESIS以稀有海洋放線菌Salinisporaarenicola和Streptomycessp．為實驗材料，隨機機械剪
5、切提取的總DNA，5’．磷酸末端補平回收40kb左右的DNA片段，與pWEB珊載體連接，經包裝蛋白包裝成噬菌體后侵染宿主細胞E．coliEPI啪，構建該菌株的基因組文庫，并對該文庫進行質量鑒定。稀有海洋放線菌Salinisporaarenicola的基因組文庫的效價達6．5x104CFI7／mI，，得到3,000個陽性克隆子，遠遠大于按覆蓋率為99．9％計算至少所需的1380個陽性克隆子數，且平均插入片段長度為36kb，重組率接近100％。成功構建的稀有海洋放線菌Streptomycessp．的基因組文庫，效價達9．0x104CF
6、U／mL，得到4000個陽性克隆子，遠遠大于按覆蓋率為99％計算至少所需的837個陽性克隆子數，且平均插入片段長度為36kb，重組率同樣接近100％。陽性克隆子保存于96孔板中，．80℃保存。所構建文庫的各項指標均達到要求，為了進一步評估Salinisporaarenicola和Streptomycessp．所能合成的所有潛在天然產物，還需要進一步檢測該文庫中包含有生物合成基因簇的大腸桿菌的表達情況。實驗后期成功克隆了稀有海洋放線菌Salinisporaarenicola的非核糖體肽合成酶(NI沖S)和鹵化酶生物合成基因簇核心區(qū)基
7、因片段。根據己發(fā)表的放線菌NRPS和鹵化酶生物合成基因簇核心區(qū)的核苷酸序列保守區(qū)設計兩對簡并性引物，采用PCR的方法擴增NRPS和鹵化酶生物合成基因簇核心區(qū)基因片段，并使用分子生物學軟件進行了序列分析。所獲得的兩段基因片段大小分別為660bp和555bp，分別編碼220個和185個氨基酸。這兩段序列與海洋放線菌SalinisporaarenicolaCNS．205的NRPS和鹵化酶生物合成基因簇核心區(qū)基因核苷酸序列的同源性分別為99％和98％。最終成功地獲得了稀有海洋放線菌Salinisporaarenicola的NRPS和鹵化酶
8、生物合成基因簇核心區(qū)基因片段，該基因片段的獲取將為分離全長基因簇以及研究該基因簇在生物合成中的功能奠定基礎?；P鍵詞：海洋放線菌；基因組文庫；腺苷酰化結構域；色氨酸鹵代酶；系統(tǒng)進⑨碩士學位論文MASTER’STHESISAbstractRarema
