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《放線菌有序基因組文庫的構(gòu)建和應(yīng)用及遺傳因子的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文放線菌有序基因組文庫的構(gòu)建和應(yīng)用及遺傳因子的研究姓名：夏海洋申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：動物學(xué)指導(dǎo)教師：楊長舉20061001夏海洋放線苗有序幕因組文庫構(gòu)建和戍用及遺傳岡予研究華中農(nóng)業(yè)人學(xué)2006屆博十學(xué)位論文段的效率可達10％以上。利用該體系嘗試了&coelicolor多個染色體大片段敲除。利用pHAQ31和SuperCosl構(gòu)建的兩套&avermtitilis基因組文庫，構(gòu)建了敲除Savermtitilis的除A、蝴血合成以外9個聚酮類抗生素生物合成基因簇載體，并完成了部分8基因簇的敲除工作。4馬杜拉霉素(Maduram
2、icin)生物合成基因簇中聚酮合成相關(guān)基因片段的克隆。以pHZl358為載體構(gòu)建了馬杜拉霉素產(chǎn)生菌A．yumaensis的基因組文庫。利用從該菌中克隆到的內(nèi)源探針，對基因組文庫篩選獲得了9個陽性克隆，通過陽性克隆的兩端測序分析，發(fā)現(xiàn)4個克隆兩側(cè)顯示出與聚酮合成酶高度同源，推測可能和馬杜拉霉素的生物合成相關(guān)。5鏈霉菌溫度敏感性線型質(zhì)粒pRIA的復(fù)制功能研究。鏈霉菌44414攜帶3個內(nèi)源線型質(zhì)粒，在40度培養(yǎng)條件下，其中pRIA質(zhì)粒發(fā)生丟失(溫度敏感性)。通過部分酶切和克隆鑒定了pRI_A的基本復(fù)制區(qū)域，由一個與&avermtilis中線型質(zhì)粒sA
3、Pl相似的新的基因和一段非編碼區(qū)組成。通過比較鑒定了＆avermtilis中線型質(zhì)粒SAPl的中心基本復(fù)制區(qū)。6諾卡氏菌環(huán)型質(zhì)粒pXTl07的復(fù)制研究。在Nocardiasp．107中發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒pXTl07是諾卡氏菌屬中報道的最小的環(huán)型質(zhì)粒之一，由4335bp組成。序列分析及功能研究顯示，該質(zhì)粒具有典型的滾環(huán)復(fù)制質(zhì)粒的特征。構(gòu)建的大腸桿菌一諾卡氏菌穿梭質(zhì)粒pHAQ22能夠在Ⅳcorallina4．1037中復(fù)制，但不能在變青鏈霉菌假伽idans)中復(fù)制。7A．yumaensis染色體基本復(fù)制區(qū)的克隆及分析。利用根據(jù)dnaA和dnaN保守序列設(shè)計的
4、簡并引物在馬杜拉放線菌中擴增到1．3kb片段。研究發(fā)現(xiàn)，尤馬馬杜拉放線菌染色體復(fù)制區(qū)位于保守基因dnaA與dnaN之間，包含919堿基對。與已發(fā)表的3個屬的放線菌染色體oriC序列的特征不同，尤馬馬杜拉放線菌的染色體oriC含有14個DnaA盒子和2個AT富含區(qū)，DnaA盒子的保守序列是(T／C)(T／C)GTCC(A／C)CA。攜帶該oriC片段的大腸桿菌質(zhì)?？梢栽谔焖{色鏈霉菌中復(fù)制和以低拷貝方式遺傳。比較來自放線菌4個屬的oriC，發(fā)現(xiàn)以oriC序列和以16SrDNA序列構(gòu)建的進化樹十分相似，進一步支持了前人的推測。關(guān)鍵詞：放線菌；有序排列
5、的基因組文庫；基因替換；次生代謝工程；遺傳因子；溫敏線型質(zhì)粒II英文摘要Abstract11地actinomycetes．filamentousbacteriabelongtohigh眥contentgram-positivegroup,haveacomplexmorphologicaldevelopmentanddifferentiationlifecyclewithuniquegeneticscharacters．Andproducemorethan8700kindsofantibioticsandphysiologicalactivity
6、chemical．Soactinomycetesweretakenasimportantmaterialsinfundermentalandapplicationresearchonmicroorganism．Inthisthesis,investigationonfunctionalgenome,antibioticbiosynthesisandDNAreplicationwerecarriedoutonStreptomycesavermililisandActinomadurayumaensis(withhi曲commercialvalue
7、s),Streptomycescoeficolor(themodelaetinomycetes)．Streptomyces．sp．44414andNocardiasp．107．n圮resultsarcfollowing：l低constructionofanorderedgenomiclibraryof&avermitilisandobtainmentthegenetic-engineeringstraintoproduceDoramectin．AgenomiclibraryofS．a(chǎn)vermitiliswasconstructedwith．th
8、ecosmidvectorSuperCosl．Aftersequencedthebotllendsof1000cosmidclones，anorder
