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1、玫瑰多糖酶法提取和柱前衍生HPLC研究 摘要:通過酶法提取玫瑰多糖,用柱前衍生高效液相色譜法分析含量。結(jié)果表明,非酶法對干花和玫瑰花渣的多糖提取率分別為9.865、5.087g/100g;酶法對其的多糖提取率為12.487、7.599g/100g。用柱前衍生高效液相色譜法分析玫瑰多糖,發(fā)現(xiàn)該多糖是由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖6種單糖組成的,其物質(zhì)量比為0.9344∶0.9818∶1.1566∶0.9763∶0.9740∶0.9745。酶法提取和不加酶提取的玫瑰多糖一級結(jié)構(gòu)的糖組成相同。關(guān)鍵詞:玫瑰多糖;酶法
2、提?。恢把苌?;一級結(jié)構(gòu)中圖分類號:O657.7文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:0439-8114(2013)20-5031-03AnalysisofRosePolysaccharidebyEnzymeExtractionandPre-columnDerivatizationHPLCZHANGYue-hui1,HANLi-wen2,ZHENGLan2,SHIJian-guo2,YANGJun-hui2,MAYao-hong1(1.ShandongInstituteofLightIndustry,Jinan250353,China;2.Biol
3、ogyInstitute/KeyLaboratoryforBiosensorofShandongProvince,ShandongAcademy9ofSciences,Jinan250014,China)Abstract:PolysaccharideofrosewasextractedbyenzymemethodandanalyzedbyHPLCwithpre-columnderivatization.Theresultsshowedthattheyieldrateofrosepolysaccharidefromdriedflower
4、sandrosedregsbynormalmethodwere9.865g/100g,5.087g/100g,respectively.Theyieldrateofrosepolysaccharidebyenzymemethodwere12.487g/100g,7.599g/100g,respectively.TheresultsofmonosaccharidecompositionofrosepolysaccharidebyHPLCwithpre-columnderivatizationshowedthatitwascomposed
5、ofmannose,rhamnose,glucuronicacid,glucose,galactoseandarabinosewithamolarratioof0.9344∶0.9818∶1.1566∶0.9763∶0.9740∶0.9745.Thesugarcompositionofprimarystructureofrosepolysaccharideextractedbyenzymemethodwasthesameasthoseextractedbynormalmethod.Keywords:rosepolysaccharide
6、;enzymemethodextraction;pre-columnderivatization;primarystructure9多糖作為一種生命活性物質(zhì),具有清除自由基和抗腫瘤作用[1,2]??仔奈嫉萚3]通過腫瘤壞死因子(TNF)單克隆抗體的ELISA法,發(fā)現(xiàn)野玫瑰多糖通過調(diào)節(jié)腫瘤壞死因子的分泌而對急性腎炎有一定的治療作用。白偉芳[4]測定了玫瑰花多糖在體外對羥基自由基和超氧陰離子自由基的清除作用,以及玫瑰花多糖的抗腫瘤活性。玫瑰花中的總糖質(zhì)量濃度高達(dá)29.5g/100g,其中可溶性糖8.8g/100g。馬猛華等[5]提取玫瑰花
7、中多糖,提取率為0.6g/100g。陳曉梅等[6]分析了鐵皮石斛原球莖多糖的結(jié)構(gòu)和功能。本試驗(yàn)分析了玫瑰花提取精油后廢水廢渣中多糖的提取方法,并以1-苯基-3甲基-5吡唑啉酮(PMP)作為柱前衍生劑[7,8],采用HPLC分析其單糖及糖醛酸的組成,并鑒定酶法對單糖及糖醛酸的組成有無影響,以期為多糖結(jié)構(gòu)及功能研究和玫瑰花的綜合開發(fā)利用提供借鑒和參考。1材料與方法1.1材料與試劑玫瑰干花以及經(jīng)提取玫瑰精油的干玫瑰花渣由濟(jì)南惠農(nóng)玫瑰花精油有限公司提供;纖維素酶(山東食品發(fā)酵工業(yè)研究設(shè)計院,食品級4萬酶活);果膠酶(山東食品發(fā)酵工業(yè)研究設(shè)計院
8、,食品級3萬酶活);甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖均購自美國Sigma公司。9色譜純乙腈;1-苯基-3甲基-5吡唑啉酮(衍生化試劑PMP)、濃硫酸、氫氧化鈉、酒石酸鉀鈉、次甲基藍(lán)、