溫度與脂多糖對(duì)櫛孔扇貝血細(xì)胞吞噬活力的影響.pdf

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1、第45卷第6期2015年6月中國海洋大學(xué)學(xué)報(bào)PERl0DICAL0F0CEANUNlVERslTY0FCHINA45(6)：031～038June，2015溫度與脂多糖對(duì)櫛孔扇貝血細(xì)胞吞噬活力的影響+徐翊軒，戰(zhàn)文斌，邢婧”(中國海洋大學(xué)教育部海水養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東青島266003)摘要：貝類無特異性免疫系統(tǒng)，細(xì)胞吞噬是其免疫防御的重要方式之一。在5、10、15、20和25℃養(yǎng)殖條件下，給櫛孔扇貝(Chlamys屈r旭以)分別注射熒光微球、脂多糖和熒光微球混合液。在注射后的0，6，12，18，24，30，36，42和48h抽取血細(xì)胞，用熒光標(biāo)記血

2、細(xì)胞以觀察其對(duì)微球的吞噬狀態(tài)，用流式細(xì)胞術(shù)測定血細(xì)胞對(duì)微球的吞噬率。結(jié)果表明，在5個(gè)養(yǎng)殖溫度下，2個(gè)處理組均自6h后扇貝血細(xì)胞內(nèi)即出現(xiàn)吞噬的微球，之后吞噬率逐漸上升，直到18～24h達(dá)到最高峰，隨后逐漸下降。5、10、15、20和25℃條件下，注射熒光微球組血細(xì)胞最大吞噬率分別為8．66％±0．26％、14．00％±0．22％。16．97％±0．55％、25．62％±0．88％和8．97％±0．25％，注射脂多糖和熒光微球混合液組分別血細(xì)胞最大吞噬率為9．75％±0．48％、17．49％±0．43％、23．13％±0．57％、34．16％±0．9

3、7％和10．42％±0．45％。20℃組的兩處理組血細(xì)胞吞噬率顯著高于其他溫度組，其次是15和10℃組，最低是5和25℃組，并且20、15℃組的最大吞噬率出現(xiàn)在18h，其他組均在24h。各養(yǎng)殖溫度組中，脂多糖和熒光微球混合液組血細(xì)胞吞噬率均高于熒光微球組。研究表明：櫛孔扇貝血細(xì)胞的吞噬活力受水溫影響顯著，脂多糖能夠顯著增強(qiáng)扇貝血細(xì)胞的吞噬活力。關(guān)鍵詞：櫛孔扇貝；血細(xì)胞；吞噬活力；溫度；脂多糖中圖法分類號(hào)：Q959．215文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1672—5174(2015)06—031-08DOI：10．16441／j．cnki．hdxb．201

4、40039貝類血細(xì)胞是其免疫防御的主要組成部分，血細(xì)胞通過吞噬、包囊、胞吐及活性氧產(chǎn)生等完成細(xì)胞免疫，還通過分泌和釋放各種免疫因子參與體液免疫[1。2]。血細(xì)胞的吞噬作用是細(xì)胞免疫的主要方式，吞噬過程主要包括趨化作用、識(shí)別接觸、內(nèi)化和消化4個(gè)階段[3]，最后清除異物。血細(xì)胞吞噬過程涉及多種因子與細(xì)胞類型，因此在某種程度上能夠反應(yīng)出機(jī)體生理等健康狀況[4。5]。眾多研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)境因子[6’8]、外源刺激睜10]和病源感染等[u43]均會(huì)引起貝類血細(xì)胞吞噬活性的變化。水溫是影響貝類免疫防御的重要環(huán)境因子，研究發(fā)現(xiàn)，過高的水溫是櫛孔扇貝(Chlamys

5、．知rye—ri)大規(guī)模死亡的主要原因之一[14-15]，水溫的驟然改變會(huì)引起貝類血細(xì)胞吞噬率、活性氧產(chǎn)量及酶活性等的變化[15-17]。脂多糖是革蘭氏陰性細(xì)菌外膜的組成部分，被稱為固有免疫的重要激活劑之一，具有免疫調(diào)節(jié)作用[1}19]，有研究發(fā)現(xiàn)其在激活血細(xì)胞增殖[20

6、、活化酶原[2川、增強(qiáng)細(xì)胞吞噬活性[223等方面效果顯著。在雙殼類中，針對(duì)血細(xì)胞的吞噬作用已開展大量研究，目前多應(yīng)用顯微鏡觀察計(jì)數(shù)法、光密度法及流式細(xì)胞術(shù)研究吞噬活性[23I。直接計(jì)數(shù)法比較直觀，但測定樣品量有限，計(jì)算誤差較大；流式細(xì)胞儀方法測定血細(xì)胞數(shù)較多，但細(xì)胞本身自發(fā)熒光

7、干擾等因素不能確定吞噬的準(zhǔn)確性。熒光微球是高分子微球，顆粒度均一、穩(wěn)定性好，應(yīng)用于細(xì)胞吞噬率的檢測具有熒光強(qiáng)度均一、易于觀察、誤差小等優(yōu)點(diǎn)，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中示蹤目標(biāo)細(xì)胞、免疫標(biāo)記、藥物載體選擇等方面應(yīng)用廣泛[24

8、，結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞吞噬率具有準(zhǔn)確、靈敏、直觀等優(yōu)點(diǎn)。因此，采用熒光微球吞噬、流式細(xì)胞儀測定方法能夠直觀、準(zhǔn)確、快速的測定血細(xì)胞的吞噬率此方法是目前優(yōu)選的細(xì)胞吞噬測定方法。櫛孑L扇貝是中國北方主要的養(yǎng)殖貝類，前期研究發(fā)現(xiàn)水溫突變對(duì)扇貝血細(xì)胞數(shù)量的變化影響顯著，甘露糖刺激能顯著激活血細(xì)胞內(nèi)6種內(nèi)源酶的活力[13

9、。本文在此基礎(chǔ)上研究櫛

10、孔扇貝在5、10、15、20和25℃養(yǎng)殖水溫下，分別注射熒光微球、脂多糖和熒光微球混合液，觀察血細(xì)胞吞噬狀態(tài)，測定血細(xì)胞吞噬率，研究水溫和脂多糖對(duì)血細(xì)胞吞噬活力的影響，以期為櫛孑L扇貝血細(xì)胞吞噬作用的研究提供數(shù)據(jù)。1材料與方法*基金項(xiàng)目：國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2012CBll4405)；國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2012BADl7802)；新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃項(xiàng)目(NCET-10—0763)；教育部留學(xué)回國人員科研啟動(dòng)基金項(xiàng)目(教外司留[201111139)資助收稿日期：2014—02—20；修訂日期：2014—05—05作者簡介：徐翊軒(

11、1977一)，男，碩士生，主要從事貝類免疫學(xué)研究。**通訊作者：E-mail：xingjing@OUC．edu．cn中國海洋大學(xué)學(xué)報(bào)1．