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《欖香烯誘導(dǎo)肺癌A細(xì)胞凋亡作用劑量和時(shí)間依賴性研究.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、·136·中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用2009年3月第3卷第6期ChinJModDrugAppl,Mar2009,Vol.3,No.6欖香烯誘導(dǎo)肺癌A549細(xì)胞凋亡作用的劑量和時(shí)間依賴性研究許浪劉丹晏丹李玉紅成肇智【摘要】目的探討欖香烯對(duì)肺癌A549細(xì)胞的增殖抑制作用及其對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。方法每批細(xì)胞按空白對(duì)照組和藥物處理組隨機(jī)分組,檢測(cè)欖香烯對(duì)癌細(xì)胞的增殖抑制作用;采用流式細(xì)胞光度分析術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期時(shí)相分布,同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察。結(jié)果欖香烯存在劑量依賴性和時(shí)間依賴性,欖香烯在48h、7
2、2h對(duì)A549細(xì)胞周期有明顯影響;欖香烯可阻滯A549細(xì)胞于S期并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,但細(xì)胞凋亡率并不完全與藥物濃度成正相關(guān)。結(jié)論欖香烯對(duì)腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖抑制作用,在一定藥物濃度范圍內(nèi),隨藥物濃度的增加欖香烯可使細(xì)胞凋亡率升高,但超過(guò)一定作用濃度,藥物的細(xì)胞毒作用增強(qiáng),細(xì)胞凋亡率則呈下降趨勢(shì)?！娟P(guān)鍵詞】欖香烯;肺癌A549細(xì)胞;細(xì)胞凋亡欖香烯是近年來(lái)我國(guó)首先從活血化瘀中藥溫莪術(shù)揮中態(tài)、大小及細(xì)胞群體生長(zhǎng)情況的不同;照相并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。提取的一種抗癌有效成分。藥理學(xué)試驗(yàn)表明,其抗癌療效確114統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
3、運(yùn)用SPSS1115進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,多組間比[1]切、毒副作用小、抗瘤譜廣,具有廣闊的應(yīng)用前景?，F(xiàn)已證較采用方差分析,組間兩兩比較采用q檢驗(yàn),按α=0105為[2]實(shí)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是其抗癌作用機(jī)制的重要方面之一。檢驗(yàn)水準(zhǔn)。本實(shí)驗(yàn)在以往研究的基礎(chǔ)上探討了欖香烯在不同藥濃度時(shí)2結(jié)果對(duì)肺癌A549細(xì)胞凋亡的影響,以期為欖香烯臨床上能更合211欖香烯對(duì)A549細(xì)胞周期的影響欖香烯存在劑量依理有效地用于肺癌治療提供一些實(shí)驗(yàn)依據(jù)。賴性和時(shí)間依賴性,欖香烯在24h對(duì)A549細(xì)胞周期無(wú)明顯1材料與方法影響,48h,7
4、2h欖香烯對(duì)A549細(xì)胞周期有明顯影響,劑量111材料和主要試劑欖香烯乳注射液由大連金港制藥有上欖香烯80μg/ml比40μg/ml作用更明顯,其作用環(huán)節(jié)主限公司提供:肺腺癌細(xì)胞株A549由重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)系臨要是影響細(xì)胞周期S期向G2、M期的轉(zhuǎn)變過(guò)程,將腫瘤細(xì)胞床生化教研室惠贈(zèng);A54培養(yǎng)在加10%胎牛血清(杭州四季阻滯在S期,減少進(jìn)入G2、M期的細(xì)胞數(shù)目抑制腫瘤細(xì)胞生青公司)的RPMI1640培養(yǎng)液(Hydone產(chǎn)品),內(nèi)含青、鏈霉長(zhǎng)代謝,減少其有絲分裂,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞數(shù)目減少。同時(shí),時(shí)素10萬(wàn)/L
5、,細(xì)胞在37℃5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng);MTT為Sigma間上24h無(wú)明顯影響,72h和48h對(duì)A549細(xì)胞周期的影產(chǎn)品,二甲亞砜為分析純,重慶東方試劑廠產(chǎn)品。響無(wú)明顯差異,因此,我們認(rèn)為欖香烯80μg/ml作用48h,抑112主要儀器流式細(xì)胞儀(FACScmaBectonDickison美制A549細(xì)胞生長(zhǎng)的效果最明顯。國(guó)),透射電子顯微鏡(HITACHI2600型日本),自動(dòng)酶標(biāo)讀212欖香烯對(duì)A549細(xì)胞凋亡的影響細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察結(jié)數(shù)儀(Bio2Rad22500型美國(guó))。果顯示,隨藥物濃度的增加細(xì)胞生
6、長(zhǎng)密度逐漸下降,正常的113方法多邊形細(xì)胞形態(tài)中異形細(xì)胞逐漸增多。與空白對(duì)照組細(xì)胞11311欖香烯對(duì)肺腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用噻唑藍(lán)還原相比,在0101mg/ml的藥物濃度作用下,細(xì)胞變化不明顯;法(MTT法)測(cè)定,用新鮮培養(yǎng)液配制欖香烯,使其終濃度成在0.04mg/ml的藥物濃度作用下,則可見(jiàn)體積縮小、胞核固為10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期縮的圓形細(xì)胞即凋亡細(xì)胞明顯增多;在0108mg/ml的藥物的細(xì)胞,用胰酶消化,臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù),用RPMI1640將A549
7、稀濃度作用下除了以上明顯變化外,尚可見(jiàn)許多散在膨大、染4釋成1×10/ml單細(xì)胞懸液,取96孔板三塊,每孔加200μl色質(zhì)疏松的不規(guī)則形細(xì)胞即壞死細(xì)胞,有些甚至已發(fā)生胞膜稀釋好的細(xì)胞,再加20μl已配制不同濃度實(shí)驗(yàn)藥物.設(shè)試劑破裂,且細(xì)胞生長(zhǎng)受抑情況明顯可見(jiàn);在0110mg/ml腦梗死對(duì)照(每孔加1640培養(yǎng)液200μl)和腫瘤細(xì)胞陰性對(duì)照,置的藥物濃度作用下,上述表現(xiàn)更加明顯;在0116mg/ml腦梗37℃5%CO2培養(yǎng)箱,每組設(shè)8個(gè)復(fù)孔,培養(yǎng)24h,48h和72h死的藥物濃度作用下,則可見(jiàn)大量細(xì)胞
8、從瓶壁脫落形成細(xì)胞后,每孔分別加5mg/mlMTT20μl,同樣條件再保溫4h,小碎片,細(xì)胞形態(tài)大小不一,正常的細(xì)胞形態(tài)幾乎不曾觀察到,心吸取上清液,每孔加200μlDMSO,置于微震蕩器上震搖大多為圓形固縮細(xì)胞或不規(guī)則形膨大細(xì)胞。5min混勻。置于酶標(biāo)儀上,以波長(zhǎng)570nm,試劑對(duì)照組調(diào)3討論零,測(cè)光密度值OD。按下式可計(jì)算出各濃度組的抑制率。誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是欖香烯抗癌作用機(jī)制的重要方面以上實(shí)驗(yàn)各重復(fù)3次,求平均值。之一,從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看,也確實(shí)證實(shí)
