資源描述：
《_欖香烯抗癌作用與誘發(fā)腫瘤細(xì)胞凋亡的研究.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、第20卷第2期大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)Vol.20,No.21998年6月JournalofDalianMedicalUniversityJun.1998β-欖香烯抗癌作用與誘發(fā)腫瘤X細(xì)胞凋亡的研究鄒麗娟李杰于麗敏邵淑娟楊佩滿盧步峰張晨(大連醫(yī)科大學(xué)第二臨床學(xué)院腫瘤科)(大連醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院組胚教研室)(解放軍210醫(yī)院)摘要β-欖香烯是從中藥莪術(shù)中提取的抗癌有效成分。試驗(yàn)用MTT方法、Hoechst33342和PI熒光染色法及流式細(xì)胞術(shù)分析法,檢測(cè)β-欖香烯乳劑對(duì)K562細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。結(jié)果提示:β-欖香烯明顯抑制K562細(xì)胞的生長(zhǎng)和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,呈濃度和時(shí)間依賴性。對(duì)K
2、562細(xì)胞的半數(shù)生長(zhǎng)抑制劑量(IC50)為17114μg/ml。提示β-欖香烯誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是其抗腫瘤作用的重要機(jī)制之一。關(guān)鍵詞β-欖香烯;K562細(xì)胞株;IC50;凋亡分類號(hào)R730.21欖香烯是從中藥莪術(shù)中提取的抗癌藥鏈霉素100μg/ml,置37℃,5%CO2孵物,是一種以β-欖香烯為主要成分,同箱中培養(yǎng)。時(shí)含有少量α及γ-欖香烯及其它萜烯類112藥物、試劑及儀器化合物,它的抗癌作用已經(jīng)證實(shí)。β-欖香β-欖香烯乳劑(大連藥物化學(xué)研究烯(β-elemene)是從莪術(shù)中提純的一種所提供);RPMI-1640(美國(guó)GI-BCO2倍半萜衍生物,為新開(kāi)發(fā)的非細(xì)胞毒性的B
3、RL公司);小牛血清(大連生物制劑抗癌藥物。本實(shí)驗(yàn)采用人紅白血病細(xì)胞株廠);hoechst33342及碘化丙啶(prodidi2K562細(xì)胞,研究β-欖香烯乳劑對(duì)k562細(xì)umiodide,PI)(Sigma公司);MTTLI3胞的殺傷及凋亡的誘導(dǎo)作用,以期為該藥-(4,5)-雙甲基-乙-唑塞-(2,臨床應(yīng)用開(kāi)發(fā)提供必要的基礎(chǔ)研究。5)-二甲基澳化四氮唑藍(lán)](Sigma公司);酶標(biāo)儀(日本島津);流式細(xì)胞儀1材料與方法(EPICSV,美國(guó)Coulter公司);其余試劑111細(xì)胞培養(yǎng)均為國(guó)產(chǎn)分析純。人紅白血病細(xì)胞株K562細(xì)胞由本校113MTT法測(cè)定β-欖香烯的細(xì)胞毒性
4、4基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院組胚教研室提供,常規(guī)培養(yǎng)于取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期K562細(xì)胞(5×10ml)RPMI-1640完全培養(yǎng)液(pH712)內(nèi)180μl。接種于96孔板內(nèi),分別加入不同(含15%小牛血清,青霉素100μg/ml和濃度的β-欖香烯乳劑20μl(對(duì)照組加培X國(guó)家自然科學(xué)基金資助課題10大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)第20卷養(yǎng)液20μl),培養(yǎng)72h后,加入濃度為5mg/ml的MTT20μl,繼續(xù)孵箱中培養(yǎng)4h,棄100μl上清后加入異丙醇100μl,充分吹打,在酶標(biāo)儀上測(cè)定595mm波長(zhǎng)的光密度值(OD值)。抑制率=(1-od藥/od對(duì))×100%。分別用相應(yīng)化療藥物濃度作橫軸、抑制率做縱
5、軸繪制曲線。在曲線上找出IC50(細(xì)胞抑制率達(dá)50%時(shí)化療藥物濃度),IC50表示化療藥物的細(xì)胞毒性。114Hoechst33342與PI染色觀察凋亡圖2β-欖香烯乳劑對(duì)K562細(xì)胞作用48小時(shí)時(shí)細(xì)胞形態(tài)及計(jì)數(shù)凋亡、壞死率細(xì)胞凋亡的影響5取1×10/mlK562細(xì)胞分別置于含給藥24h后分別收集上述不同濃度濃度為0、215、510、1010、2010、4010μg/的細(xì)胞,離心,經(jīng)PBS(1×)洗一次,ml的β-欖香烯乳劑和相應(yīng)濃度的乳劑培加入PI染液30min,4號(hào)針頭過(guò)濾后上養(yǎng)液中培養(yǎng),分別于不同的時(shí)間(24、48、72機(jī)檢測(cè)。h)取上述各細(xì)胞將每個(gè)濃度的細(xì)胞分置
6、于2結(jié)果2個(gè)1ml離心管中,離心棄上清后,分別加入濃度為8μg/ml的Hoechst33342100211β-欖香烯乳劑對(duì)K562細(xì)胞的細(xì)胞ml,濃度為100μg/ml的PI染液與毒性Hoechst33342800μg/ml共染液50μl,靜MTT法測(cè)K562細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制結(jié)置15min(遮光)后,用PBS(1×)洗2次,果見(jiàn)圖1。將沉淀重新懸于PBS(1×)中,滴片,置螢圖1結(jié)果表明,欖香烯乳劑對(duì)K562光鏡下觀察,染成藍(lán)綠色為凋亡細(xì)胞,紅色生長(zhǎng)有明顯抑制作用。且隨著劑量的增加為壞死細(xì)胞。觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)并計(jì)數(shù)凋而增高,其藥物濃度與抑制率呈直線相亡、壞死百分率。關(guān)。
7、用直線回歸方程統(tǒng)計(jì)結(jié)果示IC50為115流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞凋亡的檢測(cè)圖340μg/ml的β-欖香烯乳劑在不同的作用時(shí)間圖1β欖香烯對(duì)K562細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用對(duì)K562細(xì)胞凋亡的影響第2期鄒麗娟等:β-欖香烯抗癌作用與誘發(fā)腫瘤細(xì)胞凋亡的研究1117114μg/ml。狀,核仁消失,出現(xiàn)凋亡小體。動(dòng)態(tài)觀212熒光鏡下檢測(cè)β-欖香烯乳劑對(duì)察,凋亡細(xì)胞呈階段性改變。而被PI染K562細(xì)胞凋亡的影響成紅色的壞死細(xì)胞,鏡下觀察比較少見(jiàn),β-欖香烯乳劑對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的影且多在1%～3%,壞死細(xì)胞的多少與藥響熒光鏡觀察結(jié)果見(jiàn)圖2～4。物濃度和作用的時(shí)間長(zhǎng)短無(wú)明顯的關(guān)系
