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1、欖香烯和姜黃素誘導(dǎo)晶狀體上皮細(xì)胞凋亡的體外研究作者:黃秀榕,祁明信,康可人【關(guān)鍵詞】欖香烯;,姜黃素;,晶狀體;,上皮細(xì)胞；,凋亡 摘要:目的探討欖香烯(Ele)和姜黃素(Cur)對(duì)體外培養(yǎng)的牛晶狀體上皮細(xì)胞(LEC)凋亡的誘導(dǎo)效應(yīng)及其機(jī)制。方法將培養(yǎng)的牛LEC分別與160μg/mLEle和20μg/mLCur在CO2培養(yǎng)箱中共同孵育8,16,24,48,72h,通過(guò)透射電子顯微鏡觀察LEC超微結(jié)構(gòu);采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)測(cè)定LEC的DNA含量及線粒體跨膜電位(ΔΨm)。結(jié)果LEC分別與Ele和Cur共同孵育后,電子顯微鏡下可觀察到細(xì)胞核染色質(zhì)凝集、固縮、邊集、核碎裂等,均呈現(xiàn)典型的細(xì)胞凋
2、亡的形態(tài)學(xué)改變。FCM分析可見典型的凋亡亞G1峰,提示細(xì)胞核內(nèi)DNA含量下降,并隨藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng)而加強(qiáng)。FCM檢測(cè)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)線粒體ΔΨm下降,且在藥物作用早期已發(fā)生變化。結(jié)論Ele和Cur能顯著誘導(dǎo)LEC凋亡;細(xì)胞核內(nèi)DNA含量下降、細(xì)胞質(zhì)內(nèi)線粒體ΔΨm降低,分別是Ele和Cur誘導(dǎo)LEC凋亡的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)途徑。線粒體ΔΨm下降是Ele和Cur誘導(dǎo)LEC凋亡的早期事件?！ ￡P(guān)鍵詞:欖香烯;姜黃素;晶狀體;上皮細(xì)胞；凋亡 ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheeffectandthemechanismofelemene(Ele)andCurcumin(C
3、ur)onapoptosisoflensepithelialcell(LEC)invitro.MethodsThebovineLECculturedLEleand20μg/mLCurissionelectronmicroscopy.ThechangesofDNAcontentandmitochondrialtransmembranepotential(ΔΨm)inLECetry.ResultsThetypicalmorphologicalchangesofLECapoptosisinEleandCurgroupissionelectronmicroscope,suchaschromatinco
4、ndensationandaggregationatthenuclearperiphery,andnuclearfragmentationasedependently.TheΔΨmofLECinEleandCurgroupdecreasedfromearlystage.ConclusionEleandCurcanremarkablyinduceapoptosisofLECinvitro.ThedecreaseofDNAcontentinLECnucleusandthecollapseofmitochondrialtransmembranepotential(ΔΨm)incytoplasmare
5、thenucleuandcytoplasmeventsofapoptosismechanisms.ThedecreasedofΔΨminducedbyEleandCuristheearlyeventofLECapoptosis. KEY期),抑制腫瘤細(xì)胞增殖并導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[23]。從姜科植物的根莖姜黃中提取的姜黃素(curcumin,Cur)具有抗氧化、抗增殖、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤生長(zhǎng)等作用,且毒副作用小,故日益受到關(guān)注[47]。筆者采用電子顯微鏡及流式細(xì)胞儀(floetry,FCM),通過(guò)觀察LEC的凋亡形態(tài)改變、檢測(cè)LEC的DNA含量及線粒體跨膜電位(mitochondrialtr
6、ansmembranepotential,ΔΨm)的改變,探討Ele和Cur誘導(dǎo)LEC凋亡及其細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)機(jī)制,為從天然藥物中尋求防治后發(fā)性白內(nèi)障的藥物提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)?！ ?材料和方法 1.1材料 1.1.1試劑 欖香烯乳(大連金港制藥有限公司,批號(hào)0110113),姜黃素(美國(guó)Sigma公司),DMEM培養(yǎng)液(dulbecco’smodifiedeagle’smedium,美國(guó)Gibco公司),胎牛血清(FBS,杭州四季青生物工程材料有限公司),胰蛋白酶(Trypsin,美國(guó)Amresco公司),乙二胺四乙酸(EDTA,美國(guó)Augus公司),碘化丙啶(PI,美國(guó)Sigma公司
7、),核糖核酸酶A(RNaseA,北京華美生物工程公司),細(xì)胞凋亡線粒體流式檢測(cè)試劑盒(MitoCapturemitochondrialapoptosisdetectionkit,美國(guó)BioVision公司)?！ ?.1.2儀器 二氧化碳培養(yǎng)箱(3112A,美國(guó)Forma公司),透射電子顯微鏡(Hu12A,日本日立公司),倒置相差顯微鏡(日本Olympus公司),低溫冰箱(日本Sanyo公司),流
