β-欖香烯抗肝癌的促凋亡機制研究-論文.pdf

《β-欖香烯抗肝癌的促凋亡機制研究-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應用文檔-天天文庫。

1、世界科學技術(shù)一中醫(yī)藥現(xiàn)代化★中醫(yī)研究／[；一欖香烯抗肝癌的促凋亡機制研究六歐陽俊，沈洪，，劉軍樓2，劉亞軍一，谷靜(1．南京中醫(yī)藥大學第一臨床醫(yī)學院南京210029；2．江蘇省中醫(yī)院南京210029)摘要：目的：研究中藥莪術(shù)提取物一欖香烯對人肝癌HepG2細胞增殖抑制及誘導凋亡，以及小鼠肝癌H22荷瘤小鼠凋亡相關(guān)蛋白表達的作用。方法：體外培養(yǎng)人肝癌HepG2細胞，MrlT法檢測一欖香烯對細胞增殖的影響，AnnexinV—FITC／PI雙染檢測細胞凋亡。通過建立H22小鼠肝癌荷瘤模型，觀察一欖香烯對荷瘤小鼠腫瘤生長的抑制作用及凋亡相關(guān)蛋白的表達。結(jié)果：盧一欖香烯對HepG2細胞具有抑制增殖的作

2、用，呈劑量和時間的依賴性；AnnexinV—FITC／PI法檢測到早期凋亡細胞。不同實驗組對荷瘤小鼠腫瘤生長的抑制作用程度不同，各藥物濃度組Caspase一3蛋白均上調(diào)(P

3、MPI一1640培養(yǎng)液(WISENT每年約有6千萬人確診為此病【1J。目前臨床治療該公司，批號：350000一CL)，胎牛血清(Hyclone公司，病主要方法為手術(shù)、化療和放療，但這些治療方法MYB0814)，MTY試劑盒、AnnexinV—FITC細胞凋亡會帶來嚴重的不良反應，因此迫切需要一種低毒副檢測試劑盒(南京凱基生物科技發(fā)展有限公司，批號作用的藥物。一欖香烯是從中藥莪術(shù)中提取的有效分別為：KGA311，KGA106)，一actin(ABCAM公司，批抗癌藥物，其為非細胞毒性的抗腫瘤藥物，能明顯號：#4970)，一抗NF—KBP65、Caspase一3、辣根過氧化抑制腫瘤細胞的增殖[2

4、1，其通過阻止腫瘤細胞的細物酶(HRP)標記的二抗(CellSignaling公司，批號分別胞周期并促進腫瘤細胞凋亡來實現(xiàn)【3J。筆者通過觀察為#8242，#9665，#707492)，BCA蛋白定量試劑盒(碧一欖香烯對人肝癌細胞HepG2及小鼠肝癌H22細胞云天公司，批號：P10010S)，Marker、ECL發(fā)光盒(，nle卜的增殖抑制及凋亡情況，為進一步證實一欖香烯通mo公司)，PVDF膜(Millipore公司)。過誘導腫瘤細胞凋亡實現(xiàn)抗腫瘤提供參考依據(jù)。1．2動物與細胞株昆明小鼠，雄性，體質(zhì)量l4—16g(中國人民解1材料放軍軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心)，動物許可證1．1試劑號：S

5、CXK一(軍)2007—004；HepG2細胞株(東南大學一欖香烯乳(大連華立金港藥業(yè)有限公司，國免疫實驗室饋贈)；小鼠肝癌H22細胞株(購自ATCC北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院)。收稿日期：2013—12—08修回日期：2014一O1一O4★江蘇省中醫(yī)藥管理局領(lǐng)軍人才培養(yǎng)資助項目(LJ200901)：黃芪多糖及屆一欖香烯提高消化系腫瘤細胞免疫原性并增強免疫應答的機制研究，負責人：沈洪；江蘇省中醫(yī)院院級課題資助項目(Y11004)：通過PI3K／PKB信號傳導途徑上調(diào)自噬活性進而增強腫瘤抗原提呈能力的13一欖香烯抗肝癌免疫機制研究，負責人：沈洪，劉亞軍?！铩锿ㄓ嵶髡撸荷蚝?，教授，主任醫(yī)師，博士

6、生導師，主要研究方向：消化系疾病的中醫(yī)藥防治及機制研究。(WorldScienceandTechnology~odernizationofTraditionalChineseMedicineandMateriaMedwa]7382014第十六卷第四期*Vo1．16No．41．3儀器2．4一欖香烯乳對昆明荷瘤小鼠的影響細胞超凈臺(蘇州市華寧凈化設(shè)備有限公司，通過腹腔注射H22細胞懸液，在昆明小鼠體內(nèi)型號：BSC一1300一Ⅱ一B1)；恒溫細胞培養(yǎng)箱(SANYO傳代H22細胞，6天后抽取小鼠腹水，以1500rpm公司，型號：MCO一15AC)；低速臺式離心機(北京京離心5min，調(diào)整細胞密度為1

7、．0x106個／mL，注射細立離心機有限公司，型號：LD24—1．2)；流式細胞儀胞懸液0．2mL至昆明小鼠右腋皮下，全程嚴格無及分析軟件；垂直電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀(Bio—Rad公司)。菌操作。將40只荷瘤小鼠隨機分為4組，每組lO以上實驗儀器由南京中醫(yī)藥大學第一臨床醫(yī)學院只，分別為模型組，一欖香烯低、中、高劑量組。造模臨床醫(yī)學實驗研究中心提供。24h后，根據(jù)小鼠的體質(zhì)量，接受為期14天的灌胃治療：一欖香烯高劑量