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《-珠蛋白基因的克隆和遺傳進化分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、安徽農業(yè)科學,JournalofAnhuiAgri.Sci.2007,35(9):2555-2557責任編輯羅蕓責任校對李洪美國紅魚和大黃魚β-珠蛋白基因的克隆和遺傳進化分析11211褚武英,張平,錢榮華,印遇龍,黃瑞林(1.中國科學院亞熱帶農業(yè)生態(tài)研究所,湖南長沙410125;2.浙江大學生物醫(yī)學與儀器工程學院,浙江杭州310027)摘要根據(jù)已發(fā)表的其他脊椎動物β-珠蛋白基因序列設計并合成1對特異性引物,通過RT-PCR方法首次克隆到美國紅魚和大黃魚β-珠蛋白cDNA,其開放讀碼框均由447個堿
2、基組成,編碼148個氨基酸的多肽,預測的相對分子量分別為16333和16148Da,兩者核苷酸序列和推導的氨基酸序列同源性分別為90.4%與81.2%。將推導的美國紅魚和大黃魚β-珠蛋白氨基酸序列與其他魚類及人β-珠蛋白氨基酸序列進行同源性比較,其同源性在35.5%～70.3%,它們與同屬真口魚綱的真鯛、黃尾鯡魚、鯉魚、虹鱒等的同源性較高,而與肉鰭魚綱的肺魚及板鰓綱的鯊魚的同源性較低;二級結構預測表明,美國紅魚和大黃魚β-珠蛋白存在類似哺乳動物的8個α-螺旋區(qū),在近端與遠端與血紅素結合的組氨酸高度
3、保守。關鍵詞美國紅魚;大黃魚;β-珠蛋白;克隆中圖分類號Q785文獻標識碼A文章編號0517-6611(2007)09-02555-03MolecularCloningandGeneticEvolutionAnalysisofβ-globincDNAsfromRedDrumandLargeYellowCroakerCHUWu-yingetal(DepartmentofBiomedicalEngineering,ZhejiangUniversity,Hangzhou,Zhejiang310027)A
4、bstractTheβ-globingeneandaminoacidsequenceoflargeyellowcroaker(Pseudosciaenacrocea)andreddrum(Sciaenopsocellatus)werefirstde-scribed.Theentireopenreadingframesoftwoβ-globingeneswereboth447bplongandcodified148aminoacidresidues.Thehomologybetweenthemwas
5、90.4%fornucleotidesand81.2%fordeducedaminoacids.Aminoacididentityoftwoβ-globingenescomparedwiththosereportedinothervertebratesincludingshark,teleostsandhuman,rangedfrom35.5to70.3%.Theproximalhistidineresiduesatthehemebindingregionandtheimportantfuncti
6、onalresiduesthatwereinvolvedinthecontactswiththehemeandbetweeninterfaceswereconserved.KeywordsReddrum;Largeyellowcroaker;β-globin;Cloning脊椎動物的血紅蛋白(Hb)都是細胞內的載氧蛋白,由珠1材料與方法蛋白和血紅素構成。原始的脊椎動物如七鰓鰻的血紅蛋白1.1試驗材料大黃魚和美國紅魚系浙江省象山港的健康是單聚體,更高等的脊椎動物的Hb是由2條α-珠蛋白鏈和2成魚,體
7、重約400g,于流水試驗槽中控溫暫養(yǎng)1周,暫養(yǎng)期間[1]條β-珠蛋白鏈所組成的四聚體。近年來國外對魚類Hb的水溫控制在(22±2)℃,溶氧6mg/L,每日投喂約占體重晶體結構、生理功能、分子進化等進行了研究并取得了長足1.5%的顆粒餌料。進展,但是歐美和日本學者將研究集中在青魚將、斑馬魚等少1.2菌株和質粒E.coliDH5α菌株該室保存,克隆載體數(shù)幾種模式魚類,而其他魚類珠蛋白及其基因的研究報道很pGEM-TEasyvector購自Promega公司。少。石首魚科的大黃魚是我國特有的經濟魚類之一
8、,以體色1.3工具酶與試劑限制性內切酶、2000bpDNAmarker購金黃、味道鮮嫩而聞名。筆者克隆了大黃魚和美國紅魚的β自大連寶生物工程公司,RNA提取試劑盒購自QIAGEN公珠蛋白基因,并將兩者氨基酸殘基序列進行了比較,為下一司,其他試劑均購于上海生工生物工程公司,引物由上海博步體外重組基因導入試驗奠定基礎。亞生物工程技術有限公司合成。圖1大黃魚和美國紅魚β-珠蛋白核苷酸序列1.4總RNA的提取與反轉錄取新鮮脾臟組織10mg,用基金項目中國科學院海外杰出學者基金項目(2005
