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《用基因槍法將bt基因轉(zhuǎn)入大豆的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、第２６卷第２期大豆科學(xué)Ｖｏｌ．２６Ｎｏ．２２００７年４月ＳＯＹＢＥＡＮＳＣＩＥＮＣＥＡｐｒ．２００７用基因槍法將Ｂｔ基因轉(zhuǎn)入大豆的研究１２２２王曉春，王罡，季靜，王萍（１．河北北方學(xué)院農(nóng)業(yè)科學(xué)系，宣化０７５１３１；２．天津大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物工程學(xué)院，天津３０００７２；３．淮海工學(xué)院海洋學(xué)院，連云港２２２００５）摘要以大豆品種合豐２５的體細(xì)胞胚為受體，以Ｂｔ基因為目的基因，應(yīng)用基因槍法進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化，經(jīng)體細(xì)胞胚萌發(fā)、生根及壯苗培養(yǎng)和卡那霉素選擇培養(yǎng)，獲得了完整的抗性再生苗，經(jīng)ＰＣＲ、ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和點雜交分析鑒定，初步證明外源基因Ｂｔ已整合到大
2、豆的基因組中。關(guān)鍵詞基因槍；Ｂｔ基因；大豆；體細(xì)胞胚；遺傳轉(zhuǎn)化中圖分類號Ｓ５６５．１０３．５３文獻(xiàn)標(biāo)識碼Ａ文章編號１０００－９８４１（２００７）０２－０１４０－０４ＰＵＴＢＴＧＥＮＥＴＲＡＮＳＦＯＲＭＡＴＩＯＮＩＮＴＯＳＭＡＴＩＣＶＩＡＭＩＣＲＯＰＲＯＪＥＣＴＩＬＥＢＯＭＢＡＲＤＭＥＮＴ１２２３ＷＡＮＧＸｉａｏｃｈｕｎ，ＷＡＮＧＧａｎｇ，ＪＩＪｉｎｇ，ＷＡＮＧＰｉｎｇ（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＳｃｉｅｎｃｅｓｏｆＨｅｂｅｉＮｏｒｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｕａｎｈｕａ０７５１３１；２．ＴｉａｎｊｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏ
3、ｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｔｉａｎｊｉｎ３０００７２；３．ＨｕａｈａｉＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＭａｒｉｎｅＳｃｈｏｏｌ，Ｌｉａｎｙｕｎｇａｎｇ，２２２００５）ＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｅＳｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｏｆｓｏｙｂｅａｎＨｅｆｅｎｇ２５ｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｂｙｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ．Ｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｐｌａｎｔｓｔｏｋａｎａｍｙｃｉｎｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄ，ｔｗｏｐｏｓｉｔｉｖｅｐｌａｎｔｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄａｍｏｎｇｔ
4、ｈｅｍｂｙＰＣＲ，ａｎｄｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｐｌａｎｔｌｅｔｓｗｅｒｅｆｕｒｔｈｅｒａｎａｌｙｚｅｄｂｙｄｏｔｂｌｏｔｔｉｎｇａｎｄＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｔａｒｇｅｔＢｔｇｅｎｅｈａｄｂｅｅｎｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏｔｈｅｓｏｙｂｅａｎｇｅｎｏｍｅ．ＫｅｙｗｏｒｄｓＳｏｙｂｅａｎ；Ｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｓ；Ｂｔｇｅｎｅ；Ｇｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ長期以來，蟲害一直是制約大豆高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)、優(yōu)１９８７年康奈爾大學(xué)的Ｓａｎｆｏｒｄ等人用基因槍轉(zhuǎn)化洋質(zhì)的
5、重要因素，尤其是食心蟲每年給大豆生產(chǎn)造成蔥表皮細(xì)胞獲得成功后，這一技術(shù)很快被用來轉(zhuǎn)化的損失在１０％～１５％。隨著基因工程的發(fā)展，通過其他一系列對農(nóng)桿菌不敏感的物種和基因型，１９８８［３］轉(zhuǎn)基因技術(shù)將抗蟲基因轉(zhuǎn)入大豆，可能成為提高大年，ＭｃＣａｂｅ等用此法獲得轉(zhuǎn)基因大豆植株以來，豆產(chǎn)量和改善品質(zhì)的有效途徑之一。Ｂｔ毒蛋白基已經(jīng)成為大豆轉(zhuǎn)化的常規(guī)技術(shù)。大豆遺傳轉(zhuǎn)化所用因是蘇云金芽孢桿菌（ＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎＧｉｎｅｓｉｓ，Ｂｔ）晶的材料多種多樣，其中體細(xì)胞胚團(tuán)是胚性細(xì)胞團(tuán)，可體蛋白的簡稱，該晶體對鱗翅目、雙翅目、鞘翅目的以長期繼代增殖，具有兩極
6、性等優(yōu)點，是基因槍和農(nóng)［４］昆蟲都有毒殺作用，而對人、畜、哺乳動物和天敵無桿菌轉(zhuǎn)化的理想的靶組織（Ｓａｔｏ，１９９３）。Ｓｔｅｗａｒｔ［１，２］［５］害，是目前使用最廣泛的生物殺蟲劑。自從等（１９９６年）用合成的Ｂｔ（ＣｒｙＩＡＣ）基因，通過基收稿日期：２００６－１１－１４基金項目：“國家植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究開發(fā)與中試基地建設(shè)”專項課題（Ｊ９９－Ｂ－００１）作者簡介：王曉春（１９７２—），女，講師，碩士，主要從事作物栽培與遺傳育種工作。Ｔｅｌ：０３１３－２１１１７７８通訊作者：王罡教授，博士生導(dǎo)師。２期王曉春等：用基因槍法將Ｂｔ基因轉(zhuǎn)入大豆的研究１４
7、１因槍轟擊懸浮培養(yǎng)的球形體細(xì)胞胚，經(jīng)過潮霉素篩公司，亞精胺購自Ｓｉｇｍａ公司，Ｔａｑ聚合酶和引物、選獲得３個轉(zhuǎn)基因株系；Ｐａｒｒｏｔｔ等（１９９２）用攜帶ＢｔＤＮＡ聚合酶、ＳＤＳ、ＤＮＡ回收試劑盒及植物基因組和ＣｐＴＩ基因微彈轟擊各種基因型的大豆品種的胚ＤＮＡ提取試劑盒購自北京鼎國公司，ＨｉｎｄⅢ購自性懸浮系，得到三個轉(zhuǎn)基因大豆細(xì)胞系，已經(jīng)得到再ＴＡＫＡＲＡ寶生物工程（大連）有限公司，激素類和其＋生植株；Ｍａｕｇｈａｎ等（１９９９年）用基因槍法首次轟擊他化學(xué)試劑均購自長春金鑫公司，Ｎ尼龍膜購自固體培養(yǎng)的大豆體細(xì)胞胚，將牛酪蛋白基因轉(zhuǎn)入大Ａｍｅｒｓｈ
8、ａｍｐｈａｒｍａｃｉａ公司。豆，獲得可育轉(zhuǎn)基因植株。本研究以固體培養(yǎng)的大１．２方法豆體細(xì)胞胚為受體，以Ｂｔ基因為目的基因，
