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《大鼠再生肝細胞的分離和培養(yǎng)-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、四川動物2014年第33卷第3期SichuanJournalofZoologyVo1．33No．32014DOI：10．3969／j．issn．1000—7083．2014．03．023大鼠再生肝細胞的分離和培養(yǎng)楊軍英，劉芳，李濤，劉慧兵(1．河南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，省部共建細胞分化調(diào)控重點實驗室，河南新鄉(xiāng)453007；2．河南師范大學(xué)體育學(xué)院，河南新鄉(xiāng)453007)摘要：建立大鼠2／3肝切除模型，分別于術(shù)后恢復(fù)0h．6h、12h、24h、48h、72h、120h、168h等時問點，采用原位膠原酶消化和密度梯度離心法分離、純化再
2、生肝細胞，獲得的再生肝細胞活性95％以上，純度96％以上。用DMEM培養(yǎng)液添加其他物質(zhì)后培養(yǎng)再生肝細胞，在培養(yǎng)的96h內(nèi)，肝細胞生長狀態(tài)良好，具有分泌白蛋白和合成尿素的功能。細胞的DNA合成主要在培養(yǎng)24h以后，72h時達到高峰。關(guān)鍵詞：大鼠；再生肝細胞；細胞培養(yǎng)；白蛋白；尿素；DNA合成中圖分類號：Q2—33；Q959．837文獻標志碼：A文章編號：1000—7083(2014)03—0440—05IsolationandCultureofHepatocytesfromRegeneratingLiverofRatYANGJuny
3、ing，，LIUFang，LITao，LIUHuibing(1．CollegeofLifeScience，KeyLaboratoryforCellDifferentiationRegulation，HenanNormalUniversity，Xi~xiang，HenanProvince453007，China；2．CollegeofPhysicalEducation，HenanNormalUniversity，Xinxiang，HenanProvince453007，China)Abstract：Hepatocytesofratt
4、reatedbypaaiMhepatectomyafter0h，6h，12h，24h，48h，72h，120h，and168hwereisolatedandpurifiedbycollagenasedigestionanddensitygradientcentrifugation．Theviabilityofregeneratedhepato—cyteswasover95％，andthepuritywasmorethan96％．TheregeneratedhepatocytesgrowwellinDMEMcontaining10％
5、fetalcalfserum，andwerecapableofsecretingalbuminandsynthesizingurea．DNAsynthesisofhepatocyteswasinitiatedafter24handachievedthepeakat72h．Keywords：rat；regeneratedhepatocyte；cellculture；albumin；urea；DNAsynthesis再生生物學(xué)和再生醫(yī)學(xué)的發(fā)展使其應(yīng)用日益廣這些方法存在分離肝細胞時間長、細胞純度和活性泛。肝臟在受到藥物、毒素、部分切除或
6、者嚴重的病相對較低、肝細胞收率不高等問題。因此，作者在前毒性感染等刺激之后，殘余肝臟細胞能夠迅速增生人研究基礎(chǔ)上，利用2／3肝切除模型(partialhepa—恢復(fù)至原肝重，維持正常的肝臟生理功能(Fausto，tectomy，PH)，采用兩步灌流法和密度梯度離心法分2006)。對于肝細胞再生的研究不僅能揭示肝臟對離、純化不同恢復(fù)時期的再生肝細胞并進行培養(yǎng)，為于損傷的修復(fù)機理，用于指導(dǎo)其他器官功能紊亂的揭示肝再生機理以及肝細胞的廣泛應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。研究(Yamazakieta1．，2011)，還能用于揭示肝癌、肝1材料和方法硬化等肝
7、臟疾病的發(fā)生、發(fā)展、治療和修復(fù)機理(Hixsoneta1．，2000)。肝細胞是肝臟功能的主要完1．1實驗動物及大鼠2／3肝切除模型制備成者，肝細胞再生是肝損傷修復(fù)的第一道屏障(Rie—sD大鼠，體重210—250g，由河南師范大學(xué)實hieeta1．，2011)。原代培養(yǎng)的肝細胞較好的保留了驗動物中心提供。飼養(yǎng)溫度21oC±2℃，相對濕度肝細胞分化狀態(tài)和代謝活性，排除了其他復(fù)雜因素60％±10％，光照時間12h／d(8：00～20：00)，自由影響(鄧穎等，2006)，在藥物代謝、藥物毒理學(xué)、致飲水、攝食。癌作用、肝病機理等方面的
8、研究非常普遍，也是目前按Higgins和Anderson(1931)方法構(gòu)建大鼠部肝細胞移植研究的種子細胞之一(Nagaldeta1．，分肝切除模型。乙醚吸人麻醉大鼠，在無菌條件下，2001)。雖然已有一些分離和培養(yǎng)肝細胞的方法，但自劍突下方約1～
